雷帕霉素对光诱导下视网膜色素上皮细胞自噬的影响

目的：探讨雷帕霉素对光诱导下视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）自噬的影响。方法：将自噬双标mRFP-eGFP-LC3质粒转染进ARPE-19细胞中获得稳定表达的转染细胞株，随后随机分为6 h对照组、6h模型组、6 h雷帕霉素组；12 h对照组、12 h模型组、12 h雷帕霉素组和24 h对照组、24 h模型组、24 h雷帕霉素组。对照组避光培养，模型组受光照刺激；雷帕霉素组加入10μmol/L雷帕霉素后受光照刺激，光源采用LED冷光灯，在（16 500±500） lx光照强度下照射细胞6、12、24 h。检测转染效率，MTT检测ARPE-19细胞存活率；激光共聚焦显微镜对自噬流变化进行定性分析，透射电镜观察细胞自噬形态；蛋白免疫印迹法对Beclin1、LC3、P62自噬相关蛋白表达量进行检测。结果：与对照组相比，模型组光照6、12、24 h后，细胞存活率显著下降（P<0.001）；雷帕霉素组经光照后细胞存活率高于模型组（P<0.05）。光照6、12、24 h后模型组红色荧光斑点较对照组逐渐增多，绿色荧光斑点也随之增加，Merge图中从光照12 h开始黄色斑点数量增多明显。...