HGF慢病毒载体的构建及其转染脂肪来源间充质干细胞的实验研究

目的:本研究旨在构建携带人肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因的慢病毒载体,探索HG F慢病毒转染脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSC)的方法。方法:应用PCR法从带有HGF基因的质粒上钓取目的基因,克隆到GV287载体中。将重组GV287-HGF载体质粒和慢病毒包装质粒共转染293T细胞,测定病毒滴度,并转染ADSC。结果:HGF基因PCR产物电泳结果与预期大小一致,重组GV287-HGF质粒PCR产物电泳结果正确,酶切后产物测序分析所得结果与目的基因序列一致,含有HGF基因的重组慢病毒构建正确。通过ELISA法测得病毒滴度为5×108TU/ml。HG F重组慢病毒转染ADSC的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)值为50。结论:本研究构建表达人HGF的慢病毒载体并成功转染ADSC,为进一步研究过表达HGF的ADSC,治疗放射引起的骨髓及重要脏器损伤奠定基础。