抗人肝癌噬菌体抗体库的构建及初步筛选

目的构建抗人肝癌的噬菌体抗体库并对该库进行初步筛选。方法以RT-PCR法从经Bel7404细胞免疫的BALB／C小鼠脾淋巴细胞扩增免疫球蛋白的Fd段及k链基因，克隆到表达载体pCOMB3H-SS中并将抗体Fab段表达于单链噬菌体表面，构建噬菌体抗体库；以Bel7404细胞为抗原对所建噬菌体抗体库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的亲和筛选。结果建成了容量为2×106cfu的噬菌体抗体库，在亲和筛选过程中，噬菌体收获率逐轮得到提高，第4轮为第一轮的246倍，含Fab基因的克隆比率也由25％增到83％，表明特异性噬菌体抗体得到了富集。结论噬菌体抗体库技术系高效筛选体系，为肿瘤单抗的制备提供了有效的新途径。