| 聚乙烯亚胺介导NIH-3T3细胞体外转染pEGFP-N1系统优化 |
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| 引用本文： | 丁爱军,任丽伟,许峰,秦玉蓉,傅德智,李碧春.聚乙烯亚胺介导NIH-3T3细胞体外转染pEGFP-N1系统优化[J].第三军医大学学报,2010,32(16). |
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| 作者姓名： | 丁爱军 任丽伟 许峰 秦玉蓉 傅德智 李碧春 |
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| 作者单位： | 扬州大学动物科学与技术学院动物遗传育种与繁殖实验室,江苏扬州,225009 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划，国家自然科学基金，江苏省高校自然科学重大基础研究项目，江苏省六大人才高峰项目 |
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| 摘 要： | 目的 优化聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导的细胞转染以提高目的 基因在细胞中的表达强度.方法 根据PEI/DNA不同的质量比(0:1、0.5:1、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1)利用凝胶阻滞分析结合的情况;不同质量比PEI/DNA形成的复合物对NIH-3T3细胞的转染通过细胞表达强度获得最佳PEb/DNA质量比;比较实验组l(PEI/DNA质量比2:1)、实验组2(重复PEL/DNA质量比2:1)及实验组3(PEI/DNA质茸比4:2)3种转染方案,探讨重复转染的方法是否提高细胞表达强度.结果 ①通过凝胶阻滞分析PEI/DNA能够稳定结合的质量比是1:1～10:1;②PEI/DNA复合物对NIH-3T3细胞进行转染,其荧光表达强度当PEI/DNA(质量比)≤2时随着PEI的增加而提高,当PEI/DNA(质量比)>2时,荧光表达强度反而降低;③采用重复转染的方法实验组2细胞荧光表达强度(24.08±0.28)%明显高于实验组1(8.97±4.02)%和实验组3(14.24±2.68)%(P<0.05).结论 在PEI/DNA(质量比)=2的条件下,PEI/DNA复合物转化NIH-3T3细胞的效果比较理想,重复转染可以提高细胞转染后荧光表达强度.
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| 关 键 词： | 聚乙烯亚胺 细胞转染 表达强度 |
Optimization of in vitro transfecting NIH-3T3 cells with pEGFP-N1 by polyethylenimine |
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| Ding Aijun,Ren Liwei,Xu Feng,Qin Yurong,Fu Dezhi,Li Bichun.Optimization of in vitro transfecting NIH-3T3 cells with pEGFP-N1 by polyethylenimine[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2010,32(16). |
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| Authors: | Ding Aijun Ren Liwei Xu Feng Qin Yurong Fu Dezhi Li Bichun |
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| Institution: | Ding Aijun,Ren Liwei,Xu Feng,Qin Yurong,Fu Dezhi,Li Bichun (Laboratory of Animal Genetics and Breeding,College of Animal Science and Technology,Yangzhou University,Yangzhou,Jiangsu Province,225009,China) |
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| Abstract: | Objective To optimize the system of transfecting cells with target genes by polyethylenimine (PEI) so as to increase cell expression.Methods On the basis of PEI/DNA at different mass ratios (0:1,0.5:1,1:1,2:1,3:1,4:1,5:1,6:1,7:1,8:1,9:1,and 10:1),the ability of PEI to combine and protect DNA was investigated by agarose gel electrophoresis retardation assay.Cell fluorescence expression was analyzed after transfecting PEI/DNA complexes at different mass ratios into NIH-3T3 cells in order to obtain the optimal... |
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| Keywords: | polyethylenimine cell transfection cell expression percent |
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