| Smad4真核表达质粒的构建及转染结肠癌细胞系SW480 |
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| 引用本文： | 田笑笑,张亚历,付祥胜.Smad4真核表达质粒的构建及转染结肠癌细胞系SW480[J].广东医学,2009,30(3). |
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| 作者姓名： | 田笑笑 张亚历 付祥胜 |
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| 作者单位： | 南方医科大学南方医院消化内科,广州,510515 |
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| 摘 要： | 目的 构建Smad4真核表达质粒并筛选稳定表达野生型Smad4基因的SW480结肠癌细胞系。方法 提取正常人体胎盘组织总RNA，PCR扩增人野生型 Smad4基因，通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1(+)真核表达载体上，构建pcDNA3.1(+)-Smad4重组质粒，通过PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定，脂质体介导方法转染结肠癌细胞系SW480，G418筛选稳定表达株，RT-PCR方法检测其mRNA表达水平。结果 Smad4基因的PCR电泳结果显示在1 700bp左右有一明显亮带，连接载体后经鉴定证实为人Smad4-cDNA；稳定转染Smad4基因的SW480细胞RT-PCR结果提示Smad4的mRNA表达水平比对照细胞组明显升高。结论 成功扩增野生型Smad4基因，构建Smad4真核表达质粒，并筛选出Smad4基因稳定表达的SW480结肠癌细胞系。
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| 关 键 词： | Smad4 结肠癌 真核表达质粒 转染 |
Construction of a eukaryotic plasmid for stable expression of smad4 in colon cancer cell line |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Smad4 |
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