基因Ⅲ型乙型脑炎病毒Real-time PCR检测方法的建立及应用北大核心CSCD |
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引用本文: | 陆飞,鲁会军,李国江,刘昊,刘振江,刘燕瑜,靖杰,任静强,金宁一.基因Ⅲ型乙型脑炎病毒Real-time PCR检测方法的建立及应用北大核心CSCD[J].中国病原生物学杂志,2012(9):644-648. |
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作者姓名: | 陆飞 鲁会军 李国江 刘昊 刘振江 刘燕瑜 靖杰 任静强 金宁一 |
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作者单位: | 1.吉林农业大学动物科技学院130118;2.军事医学科学院军事兽医研究所130122;3.吉林农业科技学院132101;4.吉林大学畜牧兽医学院130062; |
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基金项目: | 公益性行业(农业)科研项目(No.201203082) |
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摘 要: | 目的建立针对云南地区流行的基因Ⅲ型乙型脑炎病毒株Real-time PCR检测方法。方法根据云南地区分离株乙型脑炎病毒株(Yunnan0901)基因组核苷酸序列设计特异性引物,构建pMD18-T-JEV-E质粒,以此为模板进行SYBR GreenⅠReal-time PCR扩增并制作标准曲线,摸索最佳反应体系条件,建立乙型脑炎病毒荧光定量PCR检测方法,并与普通RT-PCR方法相比较。结果建立的SYBR GreenⅠReal-time PCR标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系。与RT-PCR方法相比,SYBR GreenⅠReal-time PCR的灵敏度高10倍,而且不与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、基孔肯雅病毒、辛德毕斯病毒核酸发生非特异性扩增,具有良好的特异性。用该方法检测云南部分地区的蚊虫样品,其中库蚊、按蚊乙型脑炎病毒阳性率分别为17.4%和30.7%,且主要为基因型Ⅲ型。结论本实验建立的检测基因Ⅲ型乙型脑炎病毒的SYBR GreenⅠReal-time PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等特点,可应用于乙型脑炎疫情的监测。
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关 键 词: | 乙型脑炎病毒 基因Ⅲ型 Real-timePCR |
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