基于Wnt1/β-catenin信号通路探讨补阳还五汤含药血清抑制人肺动脉内皮细胞内皮间质转化的机制

目的 探讨Wnt1/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路在补阳还五汤（BYHWT）含药血清干预人肺动脉内皮细胞（HPAECs）内皮间质转化（EndMT）过程中的作用及其相关机制。方法 常法煎煮BYHWT,分别以53.36 g·kg^-1·d^-1 BYHWT和等体积生理盐水灌胃新西兰兔制备含药血清和空白血清。体外培养HPAECs,采用转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导建立EndMT模型。设立空白组（10%空白血清）、模型组（TGF-β₁+10%空白血清）、BYHWT低剂量组（TGF-β₁+2.5%含药血清+7.5%空白血清）、BYHWT中剂量组（TGF-β₁+5%含药血清+5%空白血清）和BYHWT高剂量组（TGF-β₁+10%含药血清）5个组,采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Wnt1、β-catenin和糖原合成激酶-3β（GSK-3β）蛋白的表达。为进一步明确Wnt1/β-catenin信号通路在BYHWT含药血清干预EndMT过程中的机制,构建β-catenin过表达质粒转染至HPAECs,经聚合酶链式反应确认β-catenin过表达后,采用前期研究效果最优的10%含药血清进行干预,另设空白组（10%空白血清）、模型组（TGF-β₁+10%空白血清）、BYHWT组（TGF-β₁+10%含药血清）、BYHWT+过表达质粒组（TGF-β₁+10%含药血清+空白质粒）和BYHWT+β-catenin过表达质粒组（TGF-β₁+10%含药血清+β-catenin）5个组。采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell法共同检测细胞迁移能力,免疫荧光法检测血小板内皮细胞黏附分子（CD31）、血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）、成纤维细胞特异性蛋白1（FSP1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。
结果 与空白组比较,模型组Wnt1、β-catenin蛋白表达均显著升高（P<0.01）,GSK-3β蛋白表达显著降低（P<0.01）。与模型组比较,BYHWT高剂量组Wnt1、β-catenin蛋白表达均显著降低（P<0.01）,GSK-3β蛋白表达显著升高（P<0.01）;BYHWT中剂量组β-catenin蛋白表达显著降低（P<0.01）,GSK-3β蛋白表达显著升高（P<0.01）;而BYHWT低剂量组差异无统计学意义。与空白组比较,模型组细胞增殖和迁移能力显著增强（P<0.01）,CD31和VE-cadherin荧光强度降低,FSP1和α-SMA荧光强度增加。与模型组比较,BYHWT组细胞增殖和迁移能力受到抑制（P<0.01）,CD31和VE-cadherin荧光强度增加,FSP1和α-SMA荧光强度降低,而BYHWT+β-catenin过表达质粒组以上指标变化趋势均与模型组一致。同时,与BYHWT+过表达质粒组比较,BYHWT+β-catenin过表达质粒组细胞增殖和迁移能力显著增强（P<0.01）,CD31和VE-cadherin荧光强度降低,FSP1和α-SMA荧光强度增加。结论 BYHWT含药血清可以抑制HPAECs发生EndMT,这一过程与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。