基于肠道菌群探究一贯煎多糖的结构及改善小鼠肝纤维化作用

目的 探究一贯煎多糖（YGJP -W）的基本结构特征以及其改善四氯化碳（CCl₄）诱导小鼠肝纤维化的活性,分析YGJP-W抗肝纤维化活性与其调节肠道菌群结构变化关系。方法 采用水提醇沉和弱阴离子交换色谱制备一贯煎多糖组分YGJP-W,依次采用苯酚-硫酸法、间羟基联苯法、BCA蛋白定量分析试剂盒、高效凝胶渗透色谱法（high performance gel permeation chromatography,HPGPC）、FT-IR、离子色谱仪及扫描电镜法（scanning electron microscope,SEM）对一贯煎多糖的总糖含量、糖醛酸含量、蛋白含量、相对分子质量分布、官能团、单糖组成及形貌特征进行表征,采用CCl₄诱导的小鼠模型,检测YGJP-W（50、100 mg/kg）干预3周后的小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肝组织羟脯氨酸水平,并通过HE染色和天狼猩红染色观察肝脏组织学变化,评价YGJP-W改善肝纤维化活性;采用16S rDNA测序技术评价YGJP-W对小鼠肠道菌群的影响;采用抗生素联合YGJP-W干预,评价YGJP-W是否通过调节肠道菌群发挥药效作用。结果 YGJP-W总得率为11.60%,总糖质量分数为92.48%,至少由相对分子质量为1.74×10⁵和5.6×10³的2种多糖组成,单糖组成包含半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖,其物质的量比为1.0∶2.8∶1.4∶1.6。YGJP-W干预3周后,能够显著改善CCl₄引起的肝功能异常、肝组织病理损伤、胶原沉积和纤维化。YGJP-W在改善肝纤维化的同时能够引起小鼠肠道菌群结构变化,在门水平上,YGJP-W显著性降低拟杆菌门丰度[（57.4±14.6）% vs（79.3±8.1）%,P＜0.01],增加变形菌门[（10.4±4.7）% vs（2.1±1.9）%,P＜0.01] 和放线菌门[（3.7±2.4%）% vs（0.3±0.1）%,P＜0.01）]丰度,在属水平上,YGJP-W增加狄氏副拟杆菌属Parabacteroides、埃希氏菌-志贺氏菌属Escherichia-Shigella、活泼瘤胃球菌属Ruminococcus_gnavus_group、萨特氏菌属Sutterella、毛螺菌属NK4A136组Lachnospiraceae_NK4A136_group和梭杆菌属Fusobacterium共6个菌属的丰度（LDA score＞3,P＜0.01）,降低拟普雷沃氏菌属Alloprevotella）,肠鼠杆菌属Muribaculum,普雷沃氏菌属UCG-001 Prevotellaceae_UCG-001和另枝杆菌Alistipes共4个菌属的丰度（LDA score＞3,P＜0.01）。抗生素联合YJGP-W干预,YJGP-W抗肝纤维化的活性显著减弱。结论 多糖类成分YJGP-W是一贯煎抗肝纤维化的重要物质基础,YJGP-W发挥抗肝纤维化的作用可能与其调控肠道菌群相关。