SYBR Green qPCR 检测内镜活检胃组织石蜡标本幽门螺杆菌

〔摘 要〕 目的：建立一种高效、特异的检测内镜活检胃组织石蜡包埋标本幽门螺杆菌（Hp）实时荧光定量聚合酶链 式反应（qPCR）方法。 方法：针对 Hp 23S 核糖体核糖核酸（rRNA）基因设计特异度引物,建立 SYBR Green qPCR 反应 体系,并验证该方法的特异度、灵敏度和重复性。用该方法对 20 份内镜活检胃组织石蜡标本进行检测,同时作免疫组织 化学染色分析。阳性扩增产物以 Sanger 测序法明确克拉霉素基因突变情况。 结果：本研究 qPCR 方法具备良好特异度和灵 敏度,最低可检测 2.3×10² copies·μL^-1 的质粒脱氧核糖核酸（DNA）。标准曲线表明其具有良好线性关系,直线方程为 y = –3.6106x + 44.626,R² 为 0.9879 ＞ 0.98。不同浓度标准品的批内变异系数为 0.20 % ~ 2.19 %,批间变异系数为 1.24 % ~ 2.63 %,均＜ 3 %,表明该方法的稳定性和重复性良好。针对 20 份疑似感染 Hp 的内镜活检胃黏膜组织石蜡标本,该方法 检出 Hp 阳性样品 14 份,阳性检出率为 70 %,免疫组织化学染色方法检出 Hp 阳性样品 15 份,阳性检出率为 75 %,二者 的符合率为 93.33 %。阳性扩增产物经 Sanger 测序法测序显示均为 Hp 23S rRNA 基因片段,且 14 例样品中有 5 例存在克拉 霉素耐药基因突变。 结论：本研究建立的 SYBR Green qPCR 方法的特异度、灵敏度和重复性良好,后续阳性扩增产物的测 序结果可明确克拉霉素耐药基因突变情况,适用于临床 Hp 感染和克拉霉素耐药性的检测。