单标记延伸结合荧光偏振技术快速检测B型流感亚系方法的建立及应用

目的建立一种单标记延伸（OLE）结合荧光偏振技术（FP）快速检测B型流感By和Bv亚系的新方法。方法从GenBank下载By和Bv血凝素（HA）基因各50条序列，通过MEGA软件进行分析，利用PrimerPremier5．0设计B型流感病毒亚系特异性引物和单标记延伸引物，RT-PCR扩增目的片段，用OLE引物添加亚系特异性荧光标记的双脱氧核糖核苷酸，建立单碱基延伸终止荧光偏振检测方法。结果RT-PCR扩增产物的大小分别为349、397和713bp。OLEsense引物检测Bv亚系双脱氧三磷酸胸苷（ddTTP）的FP值高于双脱氧三磷酸胞苷（ddCTP）的FP值（P〈0．01）。而By亚系则正好相反，ddCTP的FP值高于ddTTP（P〈0．01）；OLEanti—sense引物检测Bv亚系和By亚系ddGTP和ddATP的FP值均差别不大（均P〉0．05）。Bv样品毒株ddTYP的FP值均值为（159±10）mp，与Bv参照株（162mp）相近；By样品毒株ddCTP的FP值均值为（163±10）mp，与By参照株（165mp）相近。结论该方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低，适合于流感监测实验室对流感病毒的快速分子诊断。