人乳头瘤病毒6b型重组减毒沙门菌的构建及表达

目的：构建HPV6b L1-E7嵌合基因重组减毒沙门菌，为进一步粘膜免疫奠定基础。方法：用PCR方法扩增获得HPV6b的L1－E7嵌合基因片段，TA克隆后，再将L1－E7基因克隆入pTETnir15沙门菌表达质粒。用电转化法将重组表达质粒导入鼠伤寒减毒沙门菌S.BRD509(ΔaroA,ΔaroC)中，厌氧诱导其表达，蛋白样品做SDS－PAGE凝胶电泳和western blot分析。结果：用BamHI和SalI双酶切重组表达质粒pTETnir15-6bL1E7可释放2389bp和1554bp两片段，结果与预计相符。western blot结果显示，重组沙门菌在约56KD处有明显特异蛋白条带，而对照菌则无。结论：该重组沙门菌能特异地表达HPV6b L1-E7融合蛋白，人乳头瘤病毒HPV6b L1-E7重组减毒沙门菌构建成功。