白杨素提高肿瘤坏死因子-α诱导肝癌细胞HepG2凋亡能力的研究

目的 研究白杨素提高肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肝癌细胞 HepG2 凋亡的能力，并对其分子机制进行初步探讨。方法 白杨素以不同浓度 (10、20、40 μmol/L) 单独或联合 TNF-α(10 ng/mL) 处理 HepG2 细胞后，于普通及荧光倒置显微镜下观察细胞形态变化，获得细胞死亡的定性资料；流式细胞术检测 sub-G1 峰，分析峰值变化规律，获得细胞死亡的定量资料；并以 Western blotting 方法检测凋亡标志蛋白 caspase-3、caspase-8 和 PARP 原蛋白和相应的裂解产物的变化情况及凋亡抑制蛋白 Bcl-xL、cIAPs、xIAP、cFLIP 的时间-效应变化规律。结果 形态学观察可发现白杨素联合 TNF-α处理 HepG2 细胞后，与对照组比较细胞出现明显的死亡数量增加，而单独白杨素组、TNF-α组与对照组比较则未观察到明显的细胞减少 (P＞0.05)；流式细胞术分析 sub-G1 的定量资料也支持这一结果，联合处理组 sub-G1 值随着白杨素剂量增加而增大，最高达到 (27.84±0.54)%，与对照组比较有显著差异 (P＜0.05)，Hochest 33342 荧光染色在联合处理组可观察到明显的核固缩细胞增加；Western blotting 检测到凋亡标志蛋白 caspase-3、caspase-8 和 PARP 原蛋白减少、相应的活化裂解片段出现；全 caspase 酶抑制剂 z-VAD-fmk 可有效抑制联合处理组 HepG2 细胞死亡、sub-G1 峰消失比值减少，阻止凋亡标志蛋白 caspase-3、caspase-8 和 PARP 的活化降解；TNF-α 引起的凋亡抑制蛋白 cFLIP-1 表达量增加，随联合处理时间延长而明显下调，与对照组比较有明显差异，Bcl-xL、xIAP 等其他凋亡抑制蛋白没有明显改变。结论 白杨素能够有效提高 TNF-α诱导 HepG2 细胞凋亡的能力，NF-κB 调节的凋亡抑制蛋白 cFLIP-1 表达减少是其重要的分子机制。