| 急性肾损伤微环境对培养骨髓间充质干细胞分化及分裂增殖的影响 |
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| 引用本文： | 刘楠梅,田军,王巍巍,程劲,胡大勇,张金元.急性肾损伤微环境对培养骨髓间充质干细胞分化及分裂增殖的影响[J].肾脏病与透析肾移植杂志,2010,19(5). |
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| 作者姓名： | 刘楠梅 田军 王巍巍 程劲 胡大勇 张金元 |
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| 作者单位： | 解放军第四五五医院肾脏科,南京军区肾脏病专科中心,上海,200052 |
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| 基金项目： | 南京军区122工程学科带头人培养基金，南京军区医药卫生基金，南京军区科技创新重点项目基金，上海市卫生局科研课题青年基金 |
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| 摘 要： | 目的:观察体外模拟急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的微环境下,小鼠骨髓间充质干细胞(mouse mesenchymal stem cells,mMSCs)分化及分裂增殖情况。方法:采用夹闭雄性C57BL/6小鼠双侧肾蒂30min再开放30min的方法制作缺血再灌注(I/R)性AKI鼠模型,即刻取双侧肾脏皮质制作I/R肾脏匀浆上清。抽取C57BL/6小鼠的骨髓,经Percoll密度梯度离心联合贴壁培养法分离纯化出mMSCs,以流式细胞仪鉴定。取扩增3代的mMSCs分组培养:(1)对照组:含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基;(2)干预组:含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基+I/R肾脏匀浆上清。诱导1d、3d、5d、7d后倒置显微镜下观察细胞形态学变化;透射电镜观察细胞超微结构;流式细胞仪检测角蛋白18(cytokeratin18,CK18);CCK-8法检测培养mMSCs的增生;TUNEL法检测mMSCs凋亡。结果:分离获得的P3-mMSCs高表达CD29和CD44,低表达CD34和CD45。与对照组长梭形细胞相比,干预组第3天可见部分细胞为椭圆形、短梭形,至第7天大部分细胞呈圆形、椭圆形、短胖梭形;透射电镜也观察到胞质内开始出现较多的粗面内质网、溶酶体、线粒体。流式细胞仪检测发现,对照组mMSCs内仅有极微量CK18表达,而干预组CK18阳性表达率显著增加。经I/R肾脏匀浆上清干预后,不同时间点mMSCs的增殖效应均显著减弱,而TUNEL检测显示胞核染色阳性的细胞百分比有显著升高(P0.01)。结论:体外模拟的AKI微环境可诱导mMSCs部分分化为肾小管上皮样细胞,但同时也会导致培养的mMSCs凋亡,增殖能力减弱,进而减少了可肾向分化的mMSCs数量,推测这可能是MSCs体内移植促肾修复能力有限的原因之一。
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| 关 键 词： | 肾脏损伤 骨髓间充质干细胞 分化 分裂增殖 |
Differentiation, division and proliferation of cultured mesenchymal stem cells under acute kidney injury microenvironment |
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| LIU Nan-mei,TIAN Jun,WANG Wei-wei,CHENG Jin,HU Da-yong,ZHANG Jin-yuan.Differentiation, division and proliferation of cultured mesenchymal stem cells under acute kidney injury microenvironment[J].Chinese Journal of Nephrology, Dialysis & Transplantation,2010,19(5). |
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| Authors: | LIU Nan-mei TIAN Jun WANG Wei-wei CHENG Jin HU Da-yong ZHANG Jin-yuan |
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