一种肠肌间神经丛胶质细胞无血清原代培养法的建立

目的 肠胶质细胞（enteric glial cell,EGC）在肠道多种生理及病理过程的调节中发挥重要作用,为了深入研究EGC的功能,排除在体及组织水平中神经体液因素的影响,获得一种简便高效的原代EGC分离培养方法非常必要。方法 取小鼠结肠纵行肌-肌间神经丛组织,经消化分离肠胶质细胞,采用含血清和无血清培养基交替培养法去除成纤维细胞后常规传代;运用细胞免疫荧光染色法检测原代EGC纯度;运用胞内钙成像技术实时观察EGC内Ca²⁺浓度（[Ca²⁺]i）变化以检测细胞活性。结果 每次实验获得的EGC至传代前细胞量可达约6.8×10⁵;无血清培养后成纤维细胞污染显著降低;胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）阳性的EGC占细胞总数的98.44%±1.07%,钙结合蛋白S100β阳性EGC占93.61%±3.16%,GFAP与S100β双阳性EGC占93.09%±2.99%;96.00%±4.00%的细胞在ATP诱导下发生胞内钙瞬变。结论 结合无血清培养可有效去除成纤维细胞污染,得到纯度较高、活性较好的肌间神经丛EGC。