基于CXCR4启动子的中药有效成分高通量筛选细胞模型构建和应用

目的以CXCR4基因启动子为靶点,建立促干细胞归巢药物筛选细胞模型,并对中药单体进行筛选。方法将人CXCR4基因启动子序列(279 bp)插入荧光素酶报告基因载体p GL4.17-Basic中,构建重组质粒p GL4.17-CXCR4,与内参质粒p RL-TK共转染293细胞,经验证CXCR4启动子转录活性后,单细胞克隆培养以获得稳转细胞株,并用于候选中药单体1~10的筛选,最后应用Western blot验证所筛选出的中药单体促进间充质干细胞(MSCs)中CXCR4表达的作用。结果成功建立药物筛选细胞模型,筛选出候选单体6提高CXCR4启动子活性的作用最强,Western blot结果证实候选单体6可明显促进MSCs中CXCR4的表达。结论本研究建立的药物筛选细胞模型能实现对潜在促进干细胞归巢中药有效成分的高通量筛选。