| 独行菜幼苗叶片乙酰CoA酰基转移酶基因克隆、序列分析与原核表达 |
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| 引用本文： | 赵乐,马利刚,杨泽岸,冯卫生,匡海学,郑晓珂.独行菜幼苗叶片乙酰CoA酰基转移酶基因克隆、序列分析与原核表达[J].中国实验方剂学杂志,2017,23(11):34-39. |
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| 作者姓名： | 赵乐 马利刚 杨泽岸 冯卫生 匡海学 郑晓珂 |
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| 作者单位： | 河南中医药大学 药学院, 郑州 450046;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 郑州 450046,河南中医药大学 药学院, 郑州 450046;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 郑州 450046,河南中医药大学 药学院, 郑州 450046,河南中医药大学 药学院, 郑州 450046;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 郑州 450046,黑龙江中医药大学 药学院, 哈尔滨 150040,河南中医药大学 药学院, 郑州 450046;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 郑州 450046 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划“973 计划”项目（2013CB531802）；河南省科技攻关计划项目（162102310468）；河南中医学院博士科研基金项目（BSJJ2011-07） |
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| 摘 要： | 目的:研究独行菜强心苷生物合成途径的相关基因,从独行菜幼苗叶片中克隆强心苷生物合成途径关键酶乙酰CoA酰基转移酶(acetyl-CoA C-acetyltransferase,AACT)基因,进行序列分析和原核表达。方法:根据独行菜转录组数据中LaAACT基因序列设计特异性引物,克隆得到LaAACT基因的cDNA序列,构建pET-32a-LaAACT原核表达载体,诱导表达LaAACT重组蛋白。结果:LaAACT基因ORF全长为1 212 bp,编码403个氨基酸。序列分析结果显示LaAACT蛋白没有跨膜区,不含信号肽,位于细胞质中,含有硫解酶家族保守结构域。系统进化结果显示LaAACT蛋白与十字花科植物的AACT蛋白亲缘关系较近。通过IPTG诱导,在大肠埃希菌中成功表达LaAACT重组蛋白,并得到了纯化的LaAACT重组蛋白。结论:首次从独行菜幼苗叶片中克隆了LaAACT基因,建立其稳定的原核表达体系,为LaAACT蛋白抗体的制备,进一步研究LaAACT基因在独行菜强心苷生物合成途径中的功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 独行菜幼苗叶片 酶乙酰CoA酰基转移酶 基因克隆 序列分析 原核表达 |
| 收稿时间： | 2016/12/6 0:00:00 |
Cloning, Sequence Analysis, and Prokaryotic Expression of LaAACT Gene From Leaves of Lepidium apetalum Seedlings |
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| ZHAO Le,MA Li-gang,YANG Ze-an,FENG Wei-sheng,KUANG Hai-xue and ZHENG Xiao-ke.Cloning, Sequence Analysis, and Prokaryotic Expression of LaAACT Gene From Leaves of Lepidium apetalum Seedlings[J].China Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2017,23(11):34-39. |
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| Authors: | ZHAO Le MA Li-gang YANG Ze-an FENG Wei-sheng KUANG Hai-xue and ZHENG Xiao-ke |
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| Institution: | School of Pharmacy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China,School of Pharmacy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China,School of Pharmacy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China,School of Pharmacy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China,College of Pharmacy, Heilongjiang University of Chinese Medicine, Haerbin 150040, China and School of Pharmacy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | leaves of Lepidium apetalum seedlings acetyl-CoA C-acetyltransferase gene cloning sequence analysis prokaryotic expression |
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