| CHOP基因shRNA载体构建及沉默效应 |
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| 作者姓名： | 游言文 徐玉英 张钦宪 |
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| 作者单位： | 1河南中医学院人体解剖与组织胚胎学科,河南省郑州市 450008; 2郑州大学组织胚胎学教研室,河南省郑州市 450008 |
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| 摘 要： | 背景：研究认为,CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,CHOP)通路是内质网应激介导细胞凋亡的3条通路之一,目前国内外对内质网应激介导细胞凋亡在胃癌方面的研究较少。
目的：构建针对人CHOP基因的短发卡RNA表达载体,观察RNA干扰对人胃癌细胞系BGC823细胞CHOP基因表达的抑制作用。
方法：设计CHOP的shRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后重组入真核表达载体pSUPER-EGFP1,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人胃癌细胞系BGC823细胞,采用RT-PCR 和Western blotting分别检测CHOP基因mRNA 和蛋白表达的变化。
结果与结论：把针对CHOP基因的shRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pSUPER-EGFP1载体,经测序分析,插入片段正确;RT-PCR和Western blot检测显示,CHOP基因的表达水平明显降低,其中以CHOP-1为靶序列的shRNA沉默作用最强,CHOP的表达抑制率约67%。
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| 关 键 词： | 短发卡RNA ERS CHOP 细胞凋亡 胃癌 |
| 收稿时间： | 2011-08-07 |
Gene-silencing effect and small hairpin RNA vector construction of targeting human CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein gene |
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| Authors: | You Yan-wen Xu Yu-ying Zhang Qin-xian |
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| Institution: | 1Department of Human Anatomy and Embryology, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450008, Henan Province, China; 2Department of Histology and Embryology, Zhengzhou University, Zhengzhou 450008, Henan Province, China |
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