| 肽核酸钳制-PCR/K-ras突变检测方法在结直肠癌组织中的诊断应用 |
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| 引用本文： | 李泉江,胡佳佳,金晶,吴洪玉,满晓华,朱玲,高军,李兆申. 肽核酸钳制-PCR/K-ras突变检测方法在结直肠癌组织中的诊断应用[J]. 第二军医大学学报, 2013, 34(10): 1083-1087 |
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| 作者姓名： | 李泉江 胡佳佳 金晶 吴洪玉 满晓华 朱玲 高军 李兆申 |
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| 作者单位： | 1. 第二军医大学长海医院消化内科,上海 2004332. 上海体育学院中国乒乓球学院,上海 200433△共同第一作者*通信作者 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30910103911, 81272663),上海市重点科技攻关项目(11441901800),国家科技支撑计划(2006BAI02A12). |
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| 摘 要： | 目的 确定本实验室建立的肽核酸钳制(PNA)-PCR/K-ras突变检测方法的阳性判断标准,并评价其对结直肠癌组织的诊断价值。方法 将含K-ras基因12密码子突变的质粒和野生质粒以不同比例(突变/总体：0,1/3 200,1/1 600,1/800,1/400,1/200,1/100)混合作为标准样品,独立配制6个批次并分别进行PNA-PCR/K-ras突变检测,收集K-ras突变CT值及K-ras总体CT值,计算ΔCT值(突变CT值-总体CT值),采用ROC曲线分析突变CT值和ΔCT值诊断K-ras突变的最适Cut-off值,联合两者最适Cut-off值,设定该方法的最终阳性判断标准。分别采用该方法和直接测序法对35例结直肠癌组织及对应癌旁组织进行K-ras突变检测并比较分析。结果 突变模板浓度为1/800及以上的标准样品突变CT值和ΔCT值与阴性标准品之间差异存在统计学意义(P<0.05)；突变CT值和ΔCT值的最适Cut-off值分别为41.7和15.4。最终阳性判断标准为突变CT值≤41.7或ΔCT值≤15.4,对应的ROC曲线下面积为0.955(P=0.001),以此判断标准,各标准样品 (0,1/3 200,1/1 600,1/800,1/400,1/200,1/100)的阳性检测率分别为0%、66.7%、83.3%、100%、100%、100%、100%,检测下限为1/800。在结直肠癌及癌旁组织标本中,该方法阳性检测率为45.7%(32/70),与直接测序法(18.6%,13/70) 比较差异具有统计学意义(P=0.000)。结论 PNA-PCR/K-ras突变检测方法具有较高的检测灵敏度,在结直肠癌组织样本中具有较直接测序法更高的阳性检出率。
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| 关 键 词： | K-ras基因；突变；肽核酸类；聚合酶链反应 |
| 收稿时间： | 2013-02-21 |
| 修稿时间： | 2013-07-22 |
Detection of K-ras mutation by PNA-PCR/K-ras method in diagnosis of colorectal cancer tissues |
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| LI Quan-jiang,HU Jia-ji,JIN Jing,WU Hong-yu,MAN Xiao-hu,ZHU Ling,GAO Jun and LI Zhao-shen. Detection of K-ras mutation by PNA-PCR/K-ras method in diagnosis of colorectal cancer tissues[J]. Former Academic Journal of Second Military Medical University, 2013, 34(10): 1083-1087 |
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| Authors: | LI Quan-jiang HU Jia-ji JIN Jing WU Hong-yu MAN Xiao-hu ZHU Ling GAO Jun LI Zhao-shen |
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