TNFR Ⅰ-IgGFc融合基因重组腺病毒表达载体的构建及其在骨髓基质干细胞的表达 |
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引用本文: | 温茜,马骊,金丹,崔建德,罗微,王小宁. TNFR Ⅰ-IgGFc融合基因重组腺病毒表达载体的构建及其在骨髓基质干细胞的表达[J]. 中华创伤骨科杂志, 2007, 9(12): 1143-1147 |
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作者姓名: | 温茜 马骊 金丹 崔建德 罗微 王小宁 |
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作者单位: | 1. 南方医科大学生物技术学院分子免疫研究所,广州,510515 2. 南方医院创伤骨科 3. 华南理工大学生物科学与工程学院 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2007AA022458);广东省科技攻关计划(2005834001004);广州市科技攻关计划(200523-E0151);广东省医学科学技术研究基金(B2005083) |
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摘 要: | 目的 构建携带人肿瘤坏死因子受体Ⅰ胞外区和IgGFc融合基因的重组腺病毒载体(Ad-TNFRⅠ-IgGFc),体外转染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),探讨转TNFRⅠ-IgGFc基因的BMSCs治疗类风湿关节炎的可行性.方法 将TNFR Ⅰ-IgGFc基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316,与辅助质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染HEK293细胞,重组产生Ad-TNFRⅠ-IgGFc,PCR鉴定毒种正确后,进行扩增、纯化和滴度测定,转染培养至第2代BMSCs,利用RT-PCR、原位杂交、免疫组化方法,检测转染后细胞中TNFRⅠ-IgGFc的转录和表达.结果 成功构建了Ad-TNFRⅠ-IgGFc,感染性滴度达3×1010 TCID50/mL,转染后BMSCs在mRNA和蛋白水平均有TNFRⅠ-IgGFc表达.结论 构建的Ad-TNFRⅠ-IgGFc可有效转染BMSCs,并在其中高效表达,为将表达TNFRⅠ-IgGFc基因的BMSCs用于类风湿关节炎治疗的实验研究提供了基础.
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关 键 词: | 肿瘤坏死因子 腺病毒载体 骨髓基质干细胞 类风湿关节炎 |
收稿时间: | 2007-06-06 |
Construction of adenoviral vector encoding human TNFR Ⅰ-IgGFc cDNA and its expression in bone marrow stromal stem cells |
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