YAP通过增加HIF-1α转录活性进而促进小鼠下肢缺血后动脉生成

目的探讨内皮细胞Yes相关蛋白（YAP）在小鼠下肢缺血后动脉生成过程中的作用与机制。方法缺氧处理人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,并使用Westernblot检测YAP第127位丝氨酸的磷酸化水平,采用免疫荧光染色检测YAP的细胞亚定位情况;免疫共沉淀实验检测HUVECs中YAP与缺氧诱导因子1α（HIF-1α）结合的情况;萤光素酶报告基因实验检测YAP野生型（YAP-WT）质粒以及YAP丝氨酸位点突变（YAP-5SA）质粒对HIF-1α转录活性的调节;构建内皮细胞特异性YAP过表达（EC-YAP^tg）小鼠,于结扎股动脉手术后1、8、15和22d使用激光多普勒血流仪检测小鼠下肢血流恢复情况;免疫荧光染色检测小鼠腓肠肌CD31、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及巨噬细胞分化抗原3（Mac3）的表达情况。结果缺氧可以时间依赖性地下调YAP第127位丝氨酸的磷酸化,同时促进YAP在细胞核定位;免疫共沉淀实验证实,YAP可以与HIF-1α在缺氧条件下相互结合;YAP-WT或者YAP-5SA均可以显著增加HIF-1α的转录活性;与对照（YAP^flox）小鼠相比,EC-YAP^tg小鼠下肢缺血后血流恢复情况更好,腓肠肌组织染色显示新生血管的数量显著增加。结论YAP可以与HIF-1α相互结合并增加其转录活性;内皮细胞过表达YAP可以促进缺血后的动脉生成。