结核分枝杆菌特异性分泌蛋白的原核表达、纯化和免疫原性分析 |
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引用本文: | 陈曦,古淑香,贾红彦,李自慧,郑小静,刘忠泉,邢爱英,杜博平,张继增,张宗德.结核分枝杆菌特异性分泌蛋白的原核表达、纯化和免疫原性分析[J].结核病与胸部肿瘤,2009(4):254-260. |
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作者姓名: | 陈曦 古淑香 贾红彦 李自慧 郑小静 刘忠泉 邢爱英 杜博平 张继增 张宗德 |
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作者单位: | 北京市结核病胸部肿瘤研究所结核病分子生物学研究室 |
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摘 要: | 目的构建结核分枝杆菌rv1837c.rv3803c基因原核表达重组质粒,进行表达、纯化,并分析其免疫原性。方法PCR扩增结核分枝杆菌H37Rvrv1837c.rv3803c基因,并克隆入pTA2质粒。测序正确后,再亚克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv1837c.pET30a(+):rv3803c重组体。然后转化人表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),经0.4mmol/L异丙基硫代-β—D-半乳糖苷诱导1分别与组氨酸标签单克隆抗体及结核患者血清进行Western—blot,鉴定Rv1837c、Rv3803c重组蛋白。经镍离子螯和氮川乙酸一组氨酸标签亲和树脂纯化,将纯化的重组蛋白分别免疫家免,取兔血清与纯化蛋白通过Western-blot方法,检测家兔血清中的抗体。结果pET30a(+):rv1837c.pET30a(+):rv3803c重组体表达相对分子质量为92000及38000的重组蛋白,表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中,表达量分别占全菌蛋白质的30%及50%。获得纯度为90%的重组蛋白。纯化蛋白通过Western-blot鉴定证实为目的蛋白,有较强的免疫原性。结论成功构建原核表达重组质粒pET30a(+):rv1837c,pET30a(+):rv3803c,并获得Rv1837c及Rv3803c重组蛋白,为血清学诊断活动性结核病奠定了基础。
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关 键 词: | 分枝杆菌 结核 rv1837c基因 rv3803c基因 Rv1837c重组 蛋白Rv3803c重组蛋白 |
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