| HOTAIR过表达慢病毒载体的构建及稳定细胞株的建立 |
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| 引用本文： | 李晓娟,王珏,何建萍,吕梦欣,钱源. HOTAIR过表达慢病毒载体的构建及稳定细胞株的建立[J]. 安徽医科大学学报, 2021, 56(5): 683-687. DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.05.003 |
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| 作者姓名： | 李晓娟 王珏 何建萍 吕梦欣 钱源 |
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| 作者单位： | 昆明医科大学第一附属医院产科,昆明 650032;云南省第一人民医院产科,昆明 650032;昆明医科大学第一附属医院医学检验科产前诊断室,昆明 650032;昆明市妇幼保健院医学遗传与产前诊断科,昆明 650032;昆明医科大学第一附属医院产科,昆明 650032;昆明医科大学第一附属医院医学检验科产前诊断室,昆明 650032;昆明市妇幼保健院医学遗传与产前诊断科,昆明 650032;云南省检验医学重点实验室,昆明 650032;云南省实验诊断研究所,昆明 650032;云南省内设研究机构,昆明 650032 |
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| 摘 要： | ![]()
目的构建稳定过表达HOTAIR的人滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系,并验证HOTAIR的表达。方法利用PCR技术扩增HOTAIR基因全长序列,并将其克隆入LV5载体中,构建LV5-HOTAIR载体,重组质粒经双酶切鉴定及测序验证成功后,转染人胚肾细胞293T,包装过表达病毒颗粒,制备并浓缩慢病毒颗粒。将构建好的过表达HOTAIR慢病毒载体感染HTR-8/SVneo细胞,采用嘌呤霉素筛选出HOTAIR稳定表达的细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光表达;qRT-PCR验证HOTAIR表达。结果重组质粒酶切得到的条带与预期相符,过表达HOTAIR慢病毒载体中序列与目标序列一致。荧光显微镜下过表达HOTAIR组细胞有绿色荧光表达;qRT-PCR结果表明过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR表达是Control组的206.3倍(P<0.05),是NC组的232.8倍(P<0.05)。结论成功建立稳定过表达HOTAIR的HTR-8/SVneo细胞,且过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR mRNA表达水平明显升高。
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| 关 键 词： | HOTAIR 慢病毒载体 HTR-8/Svneo 子痫前期 |
Construction of HOTAIR overexpression lentivirus vector and establishment of stable cell lines |
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| Li Xiaojuan,Wang Jue,He Jianping. Construction of HOTAIR overexpression lentivirus vector and establishment of stable cell lines[J]. Acta Universitis Medicinalis Anhui, 2021, 56(5): 683-687. DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.05.003 |
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| Authors: | Li Xiaojuan Wang Jue He Jianping |
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| Abstract: | ![]()
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