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| 乙型肝炎病毒裸DNA转染原代大鼠肝细胞模型的建立 | |
| 引用本文： | 姚云清,张定凤,罗云,张大志,黄爱龙,王波,周卫平,任红,郭树华. 乙型肝炎病毒裸DNA转染原代大鼠肝细胞模型的建立[J]. 中华肝脏病杂志, 2002, 10(4): 275-279 |
| 作者姓名： | 姚云清 张定凤 罗云 张大志 黄爱龙 王波 周卫平 任红 郭树华 |
| 作者单位： | 1. 重庆医科大学第一临床学院感染科,400016 2. 400010,重庆医科大学病毒性肝炎研究所 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(39670340) |
| 摘 要： | 目的建立乙型肝炎病毒(HBV)环化裸DNA转染原代大鼠肝细胞瞬时表达模型,为进一步研究肝细胞与HBV之间的互动关系奠定基础. 方法采用原代大鼠肝细胞(PRH)作为靶细胞,电转环化HBV DNA,于转染后1～10d各时点分别以Southern杂交和斑点杂交分析HBV DNA的复制中间体与复制形式,以IMX系统检测HBsAg、HBeAg,以western免疫印迹、免疫斑点印迹和免疫细胞化学法检测HBcAg,用RT-PCR检测HBV S/X mRNA,并采用电镜观察有无Dane颗粒合成.以单纯电击PRH为对照组. 结果 HBV环化裸DNA在PRH中的复制为游离型,可见rcDNA、cccDNA和ssDNA等复制中间体;表达的蛋白质产物、HBsAg于转染后各时点PRH裂解液中均可检测到(P/N值4.83～85.69,阳性≥2.1),峰值于1～3d,转染后1～10d平均P/N值为18.239±27.459;PRH培养上清液中未检测到HBsAg;HBeAg于PRH培养上清液和细胞裂解液中均呈阴性(P/N值＜2.1);HBcAg于转染后1～3d时点内检测到低度表达;HBV S mRNA为阳性,而X mRNA为阴性;电镜未观察到Dane颗粒. 结论 HBV环化裸DNA转染原代大鼠肝细胞瞬时表达模型稳定性、可重复性均良好. |
| 关 键 词： | 乙型肝炎病毒 环化裸DNA 原代肝细胞 大鼠 瞬时表达模型 RT－PCR |
| 修稿时间： | 2001-08-30 |
An in vitro model of hepatitis B virus gene replication and expression in primary rat hepatocytes transfected with circular viral DNA |
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| YAO Yunqing,ZHANG Dingfeng,LUO Yun,ZHANG Dazhi,HUANG Ailong,WANG Bo,ZHOU Weiping,REN Hong,GUO Shuhua. Institute for Viral Hepatitis,Chongqing University of Medical Sciences,Chongqing ,China. An in vitro model of hepatitis B virus gene replication and expression in primary rat hepatocytes transfected with circular viral DNA[J]. Chinese journal of hepatology, 2002, 10(4): 275-279 | |
| Authors: | YAO Yunqing ZHANG Dingfeng LUO Yun ZHANG Dazhi HUANG Ailong WANG Bo ZHOU Weiping REN Hong GUO Shuhua. Institute for Viral Hepatitis Chongqing University of Medical Sciences Chongqing China |
| Affiliation: | Institute for Viral Hepatitis, Chongqing University of Medical Sciences, Chongqing 400010, China. |
| Abstract: | |
| Keywords: | Hepatitis B virus Circular HBV DNA Transfection Hepatocyte primary Rats In vitro model |
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