BAALC转录本1－6－8逆转录病毒表达载体的构建

目的 构建含BAALC（brain and acute leukemia, cytoplasmic）1-6-8转录本的逆转录病毒表达载体。方法 从KASUMI-1细胞株中提取mRNA，应用RT-PCR技术扩增BAALC1-6-8获得目的基因，选用pMD? 18-T Vector做TA克隆。分别双酶切TA克隆获得的阳性质粒和pcDNA?3.1/myc-His A质粒，琼脂糖电泳纯化回收前者的小片段和后者的大片段，应用T4连接酶连接后转化至E.coli DH5α中。PCR扩增BAALC-myc-His基因序列，双酶切PCR产物和pLXSN载体，T4连接酶连接后转化至E.coli DH5α中，挑选阳性克隆，PCR、双酶切及测序鉴定。结果 PCR分别扩增TA克隆产物和重组pcDNA?3.1/myc-His A-BAALC，在535bp处均可见一清晰的特异性扩增条带，显示TA克隆及重组真核表达载体成功；PCR扩增pLXSN-BAALC-His大小为664bp,双酶切及测序结果证实目的基因片段正确插入到逆转录病毒表达载体pLXSN中。结论 分离得到了BAALC 1-6-8转录本基因，并成功构建了pLXSN-BAALC-His表达载体。