基于γ干扰素释放试验的流式荧光免疫分析法检测结核分枝杆菌的方法学研究

目的 基于γ干扰素释放试验（IGRA），利用流式荧光免疫分析法建立一种检测结核分枝杆菌（TB）感染的新方法。方法 分别用植物凝集素（PHA）、TB特异性混合多肽[早期分泌靶向抗原（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP-10）]刺激全血标本产生γ干扰素（IFN-γ），用双抗体夹心法结合流式荧光技术检测培养后血浆中的IFN-γ浓度，使用受试者工作特征（ROC）曲线评价其对TB感染的诊断效能。对该方法的线性范围、最低检测限、重复性、抗干扰性能及其与市售同类产品检测的一致性进行评价。结果 流式荧光免疫分析法检测IFN-γ的线性范围为2~1 000 pg/mL，最低检测限为0.3 pg/mL；检测100 pg/mL和500 pg/mL 2个浓度标本的重复性，2个浓度下变异系数分别为4.58%和2.46%；回收试验平均回收率为98.0%；三酰甘油≤ 50 mg/mL、胆红素≤ 0.6 mg/mL、血红蛋白≤ 10 mg/mL时对流式荧光免疫分析法检测结果无干扰。通过ROC曲线确定该方法诊断TB感染的最佳截断值为10 pg/mL，此时灵敏度为82.46%，特异度为87.30%。该方法与市售TB感染T淋巴细胞斑点试验（T-SPOT）试剂盒、QuantiFERON-TB Gold（QFT）试剂盒和万泰TB-IGRA试剂盒诊断TB感染的总符合率分别为92.5%、83.0%和85.4%，Kappa系数分别为0.822、0.622和0.630。结论 本研究建立的TB感染检测方法性能良好，准确性达到市售同类产品的水平，且在重复性、检测流程等方面具有明显优势。