高、低表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的人鼻咽癌耐药细胞生物学特性差异研究

目的 探讨高表达与低表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人多药耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞ABCG2Low细胞)的生物学差异,分析两种细胞的耐药特点.方法 分离ABCG2High和ABCG2Low细胞,检测其体外克隆形成率并分析细胞周期.流式细胞术(FCM)检测两种细胞传代前及传至第5代时ABCG2阳性表达率的差异.RT-PCR检测耐药基因ABCG2、Bc1-2、MDR1、MRP、MGMT的mRNA表达差异.MTT法检测两种细胞在1～14d的吸光度,绘制生长曲线;检测两种细胞对氟尿嘧啶、顺铂、长春新碱、卡铂、表阿霉素、柔红霉素、紫杉醇、丝裂霉素等化疗药物耐药性的差异.结果 ABCG2High和ABCG2细胞在7d内的克隆形成率分别为25.24%±1.18%和16.28%±1.11%.FCM分析显示,ABCG2High的S期细胞占41.5%,ABCG2Low的G1M0期细胞占63.9%.FCM分离后,ABCG2的表达率在ABCG2High细胞为98%,在ABCG2Low细胞为2%;两种细胞传至第5代,ABCG2在前者的表达率降低为7s%,在后者升高至20%.RT-PCR显示,ABCG2 mRNA在ABCG2High细胞中的表达明显高于ABCG2low细胞,其他耐药基因在两种细胞中的表达无差异.生长曲线显示,ABCG2High细胞早期生长速度较ABCG2Low细胞快,后期生长速度逐渐减慢.耐药谱分析表明,ABCG2High细胞对8种抗肿瘤药物的IC50值高于ABCG2Low细胞两倍以上,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ABCG2High细胞是一种快周期细胞,而ABCG2Low细胞为慢周期细胞,前者更具有多药耐药的特点,可用于ABCG2介导的鼻咽癌细胞非经典多药耐药的研究.

Different biological characteristics of high-and low-on of ATP-binding cassette transporter in drug resistant human nasopharyngeal carcinoma cell