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| 多价抗人精浆蛋白/抗人CD3双特异性单链抗体的构建及表达 | |
| 引用本文： | 武国军,王禾,王栋,于磊,郝晓柯,白玉杰,王智,袁建林. 多价抗人精浆蛋白/抗人CD3双特异性单链抗体的构建及表达[J]. 中华泌尿外科杂志, 2004, 25(8): 529-532 |
| 作者姓名： | 武国军 王禾 王栋 于磊 郝晓柯 白玉杰 王智 袁建林 |
| 作者单位： | 1. 710033,西安,第四军医大学西京医院泌尿外科 2. 福州军区总医院 3. 710033,西安,第四军医大学西京医院检验科 4. 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金 ( 3 990 0 180 )，全军重点实验室研究基金 ( 1997 71 2 2 ) |
| 摘 要： | 目的 构建多价抗人精浆蛋白 (γ Sm) /抗人CD3 双特异性单链抗体 (scFv)基因 ,并进行真核表达和活性测定。 方法 利用递归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p5 3四聚功能域融合基因 ,克隆入pUC1 9载体中构建pUC1 9/IgG3/p5 3克隆载体。将抗人CD3 scFv(CD3 scFv)和抗人γ SmscFv(γ SmscFv)依次克隆入pUC1 9/IgG3/p5 3载体中 ,构建多价双特异性γ SmscFv/CD3 scFv[scFv2 (CD3 /γ Sm) ]融合基因。将融合基因克隆入真核表达载体pSecTag2 B中 ,转染HeLa细胞进行表达 ,表达产物纯化后流式细胞仪进行活性测定。 结果 获得了多价scFv2 (CD3 /γ Sm)融合基因 ,基因全长 1 6 38bp ,可编码 5 4 6个氨基酸 ,与已发表的γ SmscFv、CD3 scFv和人p5 3四聚功能域基因cDNA序列一致。表达产物经SDS PAGE和Western印迹实验证实为约 6 70 0 0的特异蛋白条带 ,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合PC 3细胞和人外周血单个核细胞 (PBMC) ,亲和力高于双特异性scFv。 结论 获得了可与PBMC和PC 3细胞特异结合的多价scFv2 (CD3 /γ Sm) ,为进一步临床应用提供了实验依据 |
| 关 键 词： | 前列腺肿瘤 基因 克隆 |
| 修稿时间： | 2003-09-11 |
Construction and expression of multivalent bispecific single chain Fv antibody gene specific for human γ-seminoprotein and CD3 molecule |
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| Abstract: | |
| Keywords: | Prostatic neoplasms Genes Cloning |
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