| 细胞外信号调节激酶通路在乙肝病毒X基因改变肝癌细胞化疗敏感性中的作用 |
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| 引用本文： | 姜迎海,李玉龙,张磊,夏令杰,王静.细胞外信号调节激酶通路在乙肝病毒X基因改变肝癌细胞化疗敏感性中的作用[J].中华实验外科杂志,2013,30(10). |
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| 作者姓名： | 姜迎海 李玉龙 张磊 夏令杰 王静 |
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| 作者单位： | 1. 河南省人民医院疼痛科,郑州,450003
2. 河南省人民医院血液病研究所,郑州,450003 |
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| 摘 要： | 目的 观察细胞外信号调节激酶(ERK)信号传导通路在乙肝病毒X基因(HBx)改变肝癌细胞HepG2对顺铂敏感性中的作用.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法从pCP10质粒中扩增482 bp HBx的开放读码框(ORF),构建表达载体pcDNA3-HBx并进行酶切及测序鉴定.应用脂质体将其转染HepG2,50 mg/L G418筛选阳性克隆,抽提mRNA,逆转录(RT)-PCR鉴定是否稳定表达HBx.Western blot法检测转染前后44×103及42×103磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达.噻唑蓝(MTT)法检测转染空脂质体组、空载体组HepG2、HBx+ HepG2对2 mg/L顺铂敏感性的差异,以及顺铂联合ERK通路特异性抑制剂PD98059对HBx+HepG2抑制率的改变.结果 从pCP10中扩增得到482 bp HBx-ORF片段.将其与pcDNA3连接后经酶切及测序鉴定,成功构建HBx-ORF表达载体.从G418抗性细胞克隆中成功扩增出482 bp HBx-ORF,表明转染后的HepG2细胞稳定表达目的片段.经Western blot及灰度扫描鉴定,HBx+细胞中p-ERK蛋白表达是空脂质体组的1.97倍,是空载体组的1.67倍.MTT法检测2 mg/L顺铂作用24 h,对HBx+ HepG2的抑制率为19.56％,明显低于对空脂质体组和空载体组HepG2的抑制率(35.21％和30.18％).而先以100 μmol/L PD98059孵育2h的HBx+ HepG2,顺铂对其抑制率上升至31.20％,与未加PD98059时比较有显著提高(P＜0.05).结论 ERK信号传导通路的激活在抑制HBx+的肝癌细胞的化疗敏感性方面起重要作用,对该通路的特异性抑制有助于提高HBx+肝癌的化疗效果.
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| 关 键 词： | 乙肝病毒X基因 细胞外信号调节激酶 癌 肝细胞 顺铂 |
The role of extracellular signal-regulated kinase cascades in the sensitivity alteration to cisplatin of HepG2 expressing hepatitis B virus X gene |
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| JIANG Ying-Hai
,
LI Yu-Long
,
ZHANG Lei
,
XIA Ling-Jie
,
WANG Jing.The role of extracellular signal-regulated kinase cascades in the sensitivity alteration to cisplatin of HepG2 expressing hepatitis B virus X gene[J].Chinese Journal of Experimental Surgery,2013,30(10). |
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| Authors: | JIANG Ying-Hai LI Yu-Long ZHANG Lei XIA Ling-Jie WANG Jing |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis B virus X gene Extracellular signal-regulated kinase Carcinoma hepatocellular Cisplatin |
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