|
|||||
|
|
| 慢病毒载体表达小鼠LAL对肝细胞的作用 | |
| 作者单位： | ;1.武汉大学中南医院药学部;2.武汉大学基础医学院生物化学与分子生物学系 |
| 摘 要： | 目的:为探讨溶酶体酸脂酶(LAL)在代谢性疾病的功能及作用机制,本实验构建小鼠源性LAL基因的慢病毒表达载体,并研究LAL在肝细胞中高表达的作用。方法:根据C57BL/6J小鼠肝脏cDNA文库设计对应引物,定点诱变PCR扩增得到两端含PacⅠ酶切位点的目的基因,经酶切连接至pWPI-GFP慢病毒载体后筛选并测序鉴定。重组载体经Lipofectamine 2000瞬时转染至小鼠Hepa 1-6肝癌细胞系,荧光显微镜观察GFP表达反映转染效率,利用30μg/ml氧化的LDL(ox-LDL)孵育细胞8h作为氧化应激条件,实时定量PCR(qPCR)检测目的基因LAL及肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)等基因的mRNA水平。结果:所构建的pWPI-LAL慢病毒表达载体序列正确,瞬时转染Hepa 1-6细胞有效升高LAL的mRNA表达水平;与基础及氧化刺激下的对照组相比,LAL表达均显著降低炎症相关基因TNFα、IL-6的mRNA水平(P<0.01)。结论:成功构建的pWPI-LAL慢病毒载体可在肝细胞内有效表达,并发挥抗炎作用。 |
| 关 键 词： | 溶酶体酸脂酶 慢病毒载体 肝细胞 肿瘤坏死因子α 白细胞介素-6 |
Effects of Mouse Lysosomal Acid Lipase Overexpression Using Letivirus Vector on Hepatocytes |
|
| Abstract: | |
| Keywords: | |