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大鼠BDNF基因复制缺陷型重组腺病毒的构建与鉴定
引用本文:王鹏 吴燕峰 黄文林 唐勇 黄霖 杨睿 沈慧勇. 大鼠BDNF基因复制缺陷型重组腺病毒的构建与鉴定[J]. 中山医科大学学报, 2006, 27(2): 135-139
作者姓名:王鹏 吴燕峰 黄文林 唐勇 黄霖 杨睿 沈慧勇
作者单位:[1]中山大学附属第二医院矫形外科学,广东广州510120 [2]中山大学附属第二医院脐血库,广东广州510120 [3]肿瘤防治中心实验研究部,广东广州510060
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30271311);广东省自然科学基金资助项(36642);广东省科技厅重大项目(2004A30201002)
摘    要:
【目的】构建携带大鼠脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)目的基因的复制缺陷型重组腺病毒,并初步检测其体外表达目的基因的能力。【方法】提取大鼠脑组织总RNA,使用RT—PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18-T Simple载体测序,将测序完全正确的BDNF目的基因克隆入pShuttle2中,然后利用体外连接法将BDNF目的基因克隆入Adeno—X^TM腺病毒骨架中。Lipofectamine^TM 2000法转染HEK293细胞包装携带BDNF目的基因的重组腺病毒,少量提取重组腺病毒DNA检测证实为复制缺陷型BDNF基因重组腺病毒后大量扩增。蛋白电泳及Western blot法初步检测BDNF目的基因在HEK293细胞中的表达。【结果】成功构建了携带大鼠BDNF目的基因的复制缺陷型重组腺病毒。并证实其在HEK293细胞中可高水平表达BDNF目的基因。【结论】利用体外连接法可方便、快捷地构建携带BDNF目的基因的复制缺陷型重组腺病毒,并可在体外高水平表达表达其所携带的目的基因。

关 键 词:脑源性神经营养因子 基因重组 腺病毒载体
文章编号:1672-3554(2006)02-0135-05
收稿时间:2005-10-12

Construction and Identification of Replication-deficient Recombinant Adenovirus Cloned with a SD Rat BDNF Gene
WANG Peng, WU Yan-feng, HUANG Wen-lin, TANG Yong, HUANG Lin, YANG Rui, SHEN Hui-yong. Construction and Identification of Replication-deficient Recombinant Adenovirus Cloned with a SD Rat BDNF Gene[J]. Academic Journal of Sun Yat-sen University of Medical Sciences, 2006, 27(2): 135-139
Authors:WANG Peng   WU Yan-feng   HUANG Wen-lin   TANG Yong   HUANG Lin   YANG Rui   SHEN Hui-yong
Affiliation:1.Department of Orthopedics; 2.Cord Blood Bank, The Second Affiliated Hospital, SUN Yat-sen University, Guangzhou 510120, China; 3.Department of Experimental Research, Cancer Center, SUN Yat-sen University, Guangzhou 510060, China
Abstract:
Keywords:replication-deficient recombinant adenovirus   genetic recombination   adenovirus vector
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