| 经典方法与LaSRT法测定绿色荧光蛋白标记重组病毒滴度的研究 |
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| 引用本文： | 江千里,王健民,江汕,温丽敏,周虹. 经典方法与LaSRT法测定绿色荧光蛋白标记重组病毒滴度的研究[J]. 南方医科大学学报, 2003, 23(10): 1101-1103 |
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| 作者姓名： | 江千里 王健民 江汕 温丽敏 周虹 |
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| 作者单位： | 第二军医大学长海医院血液科,上海,200433;南京医科大学病理教研室,江苏,南京,210029 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30172347),上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划(98BR029)~~ |
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| 摘 要： | 目的以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记基因的重组逆转录病毒为例,对经典方法与批量快速病毒滴度法(LaSRT)测定病毒滴度进行比较研究。方法(1)经典方法:于6孔培养板分别接种NIH3T3细胞2×105/孔,培养12 h 后分别以0.5 ml、50 μl和5 μl带有GFP 标记基因的病毒感染,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以流式细胞仪检测细胞eGFP 率。病毒滴度(TU/ml)=(2×105×细胞eGFP 率)/病毒原液体积。(2)LaSRT法:NIH3T3 细胞以5 000/孔接种于96 孔板,12 h后更换成完全培养液90 μl/孔,以8孔为一组,第1 孔中加入病毒液10 μl,此后每孔依次10∶1 倍比稀释,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以浓度自高到低的方向,在荧光倒置显微镜下确定计量孔(第n孔),计数孔中的阳性细胞数m。病毒滴度(TU/ml)=m×10n 1。(3)对7批病毒以LaSRT法研究,探讨冻存/复苏过程对重组病毒滴度的影响。结果经典方法测定的重组病毒滴度为(1.54±0.38)×106 TU/ml,LaSRT法测定的病毒滴度为(1.33±0.57)×106 TU/ml,两者无统计学差异(P>0.05)。LaSRT法可以大批量、快速地测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度。单次冻存/复苏后的病毒滴度为冻存前的(18.1±9.9)%(n=7)。结论LaSRT法和经典方法测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度,结果无统计学差异;LaSRT法获得结果简
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| 关 键 词： | 流式细胞术 基因重组逆转录病毒 病毒滴度测定法 绿色荧光蛋白 |
| 文章编号： | 1000-2588(2003)10-1101-03 |
| 修稿时间： | 2003-07-27 |
Large-scale real-time titration of green-fluorescence-protein-marked recombinant retrovirus: comparison with standard titration method |
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| JIANG Qian-li ,WANG Jian-min ,JIANG Shan ,WEN Li-min ,ZHOU Hong. Large-scale real-time titration of green-fluorescence-protein-marked recombinant retrovirus: comparison with standard titration method[J]. Journal of Southern Medical University, 2003, 23(10): 1101-1103 |
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| Authors: | JIANG Qian-li WANG Jian-min JIANG Shan WEN Li-min ZHOU Hong |
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| Affiliation: | JIANG Qian-li 1,WANG Jian-min 1,JIANG Shan 2,WEN Li-min 1,ZHOU Hong 11 Department of Hematology,Changhai Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China, 2 Department of Pathology,Nanjing Medical University,Nanjing 210029,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | flow cytometry recombinant retrovirus virus titration method green fluorescence protein |
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