| 实时荧光定量PCR测定TRAIL mRNA质粒标准品的构建 |
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| 引用本文： | 毛丽萍,张子玉,吴月平,陈琳. 实时荧光定量PCR测定TRAIL mRNA质粒标准品的构建[J]. 医学检验与临床, 2009, 20(6). DOI: 10.3969/j.issn.1673-5013.2009.06.001 |
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| 作者姓名： | 毛丽萍 张子玉 吴月平 陈琳 |
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| 作者单位： | 南通大学附属南通第三医院检验科,江苏南通,226006 |
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| 基金项目： | 江苏省南通市社会发展基金资助课题 |
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| 摘 要： | 目的 构建pGEM-T-TRAIL重组质粒标准品为临床检测TRAIL mRNA水平奠定基础.方法 在TRAIL基因第二和第三外显子区设计特异性引物和荧光探针,提取血清HBV DNA阳性乙肝患者的外周血单个核细胞总RNA,逆转录合成cDNA,扩增目的 片断,纯化PCR产物与pGEM-T Easy载体连接,转化感受态菌DH - 5α,经蓝白斑筛选,PCR鉴定阳性克隆,并进一步测序分析.提取重组质粒测定DNA浓度后,10倍倍比稀释,建立TRAIL质粒标准品.结果 扩增目的 片段长度为110 bp,测序结果证实所构建的质粒序列与NCBI基因库TRAIL序列性一致.结论 成功构建了实时荧光定量PCR 测定TRAIL mRNA质粒标准品.
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| 关 键 词： | 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 质粒标准品 实时荧光定量RT-PCR |
Construct the plasmid standard of TRAIL mRNA for real-time PCR determination |
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| Mao Liping,Zhang Ziyu,Wu Yueping,Chen Lin. Construct the plasmid standard of TRAIL mRNA for real-time PCR determination[J]. Medical Laboratory Science and, 2009, 20(6). DOI: 10.3969/j.issn.1673-5013.2009.06.001 |
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| Authors: | Mao Liping Zhang Ziyu Wu Yueping Chen Lin |
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