rhIL—13在毕氏酵母中的表达及生物学活性研究

目的 在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达重组人白介素-13（rhIL-13)，便于进一步研究开发。方法 根据酵母对密码子的偏爱性设计并人工合成了人IL-13编码基因片段，经T4DNA连接酶、PCR技术连接形成IL-13cDNA全长序列；将其托入pPICZαA质粒中，构建成pPICZαA-IL-13表达载体。该载体经SacI线形化后以电转化法导入GS115酵母菌株中，经YPD平板Zeocine抗性筛选获得IL-3表达阳性菌株；用Western Blotting和ELISA检测发酵上清中IL-13的抗原性和表达量，B9-11细胞株分析其生理学活性。结果 15%—SDS-PAGE显示重组人IL-13分子量约13kd,Western-blotting证实为人IL-13，ELISA测定在摇瓶培养上清表达量达15ug/ml，其生物学活性同标准品一样具有剂量依赖性的刺激B9-11细胞株增殖的作用。结论 成功获得IL-13人工基因和稳定分泌蛋白的基因工程菌株。该重组蛋白的生物学活性达到标准品的要求。