| 点突变型HIF-1α诱导犬骨髓基质干细胞骨向分化的研究 |
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| 作者姓名： | 俞建英 朱思姮 邹多宏 |
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| 作者单位： | 1. 上海市奉贤区海湾医院 口腔科,上海,201418
2. 安徽医科大学附属口腔医院 正畸科,安徽 合肥,232232
3. 安徽医科大学附属口腔医院 正畸科,安徽 合肥 232232;安徽省口腔临床医学重点学科,安徽省口腔疾病研究省级实验室,中央与地方共建口腔医学中心实验室,安徽合肥232232 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81100788);教育部科技研究重点项目(212080);安徽医科大学博士科研启动基金(XJ201109);安徽医科大学“青年拔尖人才支持计划”项目~~ |
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| 摘 要： | 目的:检测点突变型HIF-1α对犬骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells.BMSCs)骨向分化的作用.方法:采用LR重组系统构建慢病毒载体Lenti-WT(wild HIF-lα)、Lenti-MT(mutant HIF-1α)及对照组LentiLacZ.分别用Lenti-LacZ、Lenti-WT及Lenti-MT转染犬BMSCs,以LacZ组为对照,成功转染后,分别在0、1、4、7、14及21d提取总RNA和蛋白质,通过RT-PCR和Western印迹检测目的基因在体外常氧条件下对BMSCs成骨因子表达的调控.将带有目的基因的BMSCs按2×105/孔接种至6孔板,分别于14d和21d,运用茜素红染色(alizarin red-S staining,ARS)检测其钙结节的表达采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析.结果:当MOI=9时,BMSCs的转染效率达90％以上.目的基因转染后第4天,BMSCs的成骨因子在mRNA和蛋白水平表达显著提高,14～21 d时达到高峰,并维持在高表达状态(P＜0.05).ARS结果表明,目的基因在常氧条件下可诱导BMSCs向成骨方向分化.结论:体外常氧条件下,突变型HIF-1α能够稳定表达且保持高度活性,Lenti-MT可显著提高犬BMSCs的成骨活性.
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| 关 键 词： | HIF-1α BMSCs 基因转染 骨生成 |
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