| 稳定表达可诱导共刺激分子CHO细胞株的筛选及其生物学活性鉴定 |
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| 引用本文： | 丁庆莉,刘梦蕾,龙宪连,沈茜. 稳定表达可诱导共刺激分子CHO细胞株的筛选及其生物学活性鉴定[J]. 第二军医大学学报, 2008, 29(3): 0254-0258 |
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| 作者姓名： | 丁庆莉 刘梦蕾 龙宪连 沈茜 |
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| 作者单位： | 第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433;第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433;第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433;第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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| 摘 要： | ![]()
目的:构建携带人可诱导共刺激分子(inducible costimulator molecule,ICOS)基因的重组逆转录病毒载体,筛选稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株,并对其生物学活性进行鉴定.方法:RT-PCR法从人PBMC中获取ICOS cDNA,定向克隆到逆转录病毒载体上,制备逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS;经病毒包装细胞包装后抗性筛选出产高滴度病毒的细胞株,用高滴度病毒上清感染CHO细胞,抗性筛选出稳定表达细胞株.将CHO-ICOS细胞和PBMC以不同比例(1:1、1:2、1:5、1:10)共培养,加入亚刺激剂量(200 ng/ml)的抗人CD3抗体,采用3H-TdR掺入法检测PBMC的增殖,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD25表达情况,并以CHO-pMSCV细胞和PBMC以 1:1比例共培养作为阴性对照以及未处理的PBMC作为空白对照.结果:成功构建逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS,筛选出稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株.3H-TdR掺入法和流式细胞仪检测结果表明,与阴性对照及空白对照相比,CHO-ICOS细胞与PBMC共培养能抑制CD3抗体诱导的PBMC增殖及活化(P＜0.05或P＜0.01),细胞比例为1:1时抑制率最大,分别为(68±5.9)%、(44.08±3.26)%.结论:成功建立具有生物学活性的膜稳定表达人ICOS蛋白的CHO细胞株,为今后研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 可诱导共刺激分子 重组逆转录病毒载体 转染 |
| 文章编号： | 0258-879X(2008)03-0254-05 |
| 收稿时间： | 2007-10-09 |
| 修稿时间： | 2007-10-09 |
Screening for CHO cell line stably expressing inducible costimulator protein and its biological activity |
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| DING Qing-li,LIU Meng-lei,LONG Xian-lian and SHEN Qian. Screening for CHO cell line stably expressing inducible costimulator protein and its biological activity[J]. Former Academic Journal of Second Military Medical University, 2008, 29(3): 0254-0258 |
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| Authors: | DING Qing-li LIU Meng-lei LONG Xian-lian SHEN Qian |
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| Abstract: | ![]()
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