| 特异性启动子LEP503介导的自杀基因系统对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用 |
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| 引用本文： | 杨晋,卢奕,刘天津,蒋永祥. 特异性启动子LEP503介导的自杀基因系统对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用[J]. 眼科新进展, 2011, 31(10): 912-916 |
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| 作者姓名： | 杨晋 卢奕 刘天津 蒋永祥 |
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| 作者单位： | 1. 复旦大学附属眼耳鼻喉科联院眼科, 上海市,200031
2. 200031 上海市,中科院上海生命科学院细胞研究所;海市,复旦大学附属眼耳鼻喉科联院眼科 |
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| 基金项目： | 上海市自然科学基金，上海市卫生局青年科研基金 |
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| 摘 要： | 目的构建晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)特异性启动子LEP503(lens epithelium gene product503)调控的Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP载体,观察慢病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙环鸟苷系统(herps simplex virus thymidine kinase/ganciclov-ir,HSV-tk/GCV)自杀基因系统对人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖的靶向性抑制作用。方法用RT-PCR方法从HLEC基因组中克隆LEP503启动子序列,构建单纯LEP503启动子调控HSV-tk基因表达的慢病毒载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP,同时构建广谱启动子巨细胞病毒(cytomegalo virus,CMV)调控的HSV-tk载体Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP。将特异性表达载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC和Hela细胞,用荧光显微镜观察荧光强度,用RT-PCR方法评估相关蛋白的组织特异性表达。将Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP和Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC,通过荧光显微镜观察EGFP的表达,用流式细胞仪及RT-PCR比较CMV与LEP503启动子介导下游靶基因HSV-tk的表达差异。结果 Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP能在HLEC中特异性表达,但Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的表达效率明显低于Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP。转染Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的HLEC在20mg·L-1GCV作用48h后EGFP阳性细胞的形态发生明显变化;GCV作用24h后Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP转染HLEC较正常HLEC和Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP转染Hela细胞活性有明显抑制,且随时间的延长抑制效果逐渐增强。结论 LEP503启动子能介导HSV-tk基因在HLEC中特异表达,并介导HSV-tk/GCV自杀基因系统靶向性抑制HLEC增殖,但该启动子表达效率较低,所介导的HSV-tk/GCV系统对HLECs增殖的抑制效率低于CMV启动子。
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| 关 键 词： | 慢病毒 单纯疱疹病毒酶 胸苷激酶 晶状体上皮细胞 特异性启动子 LEP503 自杀基因系统 |
Selective cytotoxicity of LEP503 promotermediated suicide gene system on human lens epithelial cells |
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| YANG Jin,LU Yi,LIU Tian-Jin,JIANG Yong-Xiang. Selective cytotoxicity of LEP503 promotermediated suicide gene system on human lens epithelial cells[J]. Recent Advances in Ophthalmology, 2011, 31(10): 912-916 |
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| Authors: | YANG Jin LU Yi LIU Tian-Jin JIANG Yong-Xiang |
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| Affiliation: | YANG Jin,LU Yi,LIU Tian-Jin,JIANG Yong-Xiang From the Department of Ophthalmology,Eye and ENT Hospital,Fudan University,Shanghai 200031,China,Genetic Engineering Group,Institute of Biochemistry and Cell Bioiogy,Chinese Academy of Science |
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| Abstract: | Objective To construct human lens epithelial cells(HLEC) specific promoter lens epithelium gene product 503(EP503)-mediated Lenti-HSV-tk-EGFP vector and investigate the selective cytotoxicity of lentivirus mediated suicide system of herps simplen virus thymidine kinase/ganciolovir(HSV-tk/GCV) on HLEC.Methods LEP503 promoter was cloned from the genome of HLEC,and Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP vector was constructed by LEP503 promoter replacing cytomegalo virus(CMV) promoter from Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP vector.The l... |
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| Keywords: | lentivirus simplex virus thymidine kinase lens epithelial cells specific promoter LEP503 suicide gene system |
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