大黄虫丸对转化生长因子-β1诱导A549细胞上皮-间充质转化的影响

目的：基于“IPF患者存在肺络干血”假说,观察大黄虫丸含药血清对TGF-β1诱导后A549细胞上皮-间充质转化(EMT)及Smad3,Collagen Ⅲ表达的影响,探讨其防治特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法：正常培养并取对数生长期A549细胞,TGF-β1对其诱导48 h,电子显微镜下观察A549细胞的形态学变化;选择吡非尼酮（PFD）为阳性对照药,RT-PCR法检测EMT相关基因及Smad3 mRNA的表达;Western Blottingting法检测Smad3,p-Smad3,Collagen Ⅲ蛋白表达。结果：成功获取发生EMT的A549细胞;以α-SMA mRNA表达情况判断EMT程度由高到低依次为:模型组(M),大黄虫丸含药血清大剂量组(D),西药组(P),大黄虫丸含药血清中剂量组(Z),大黄虫丸含药血清小剂量组(X),空白对照组(K);与M组比较,Z组,X组,P组中Collagen Ⅲ表达不同程度降低(P<0.05),且其在Z组与K组中表达差异无统计学意义(P>0.05);与M组及K组比较,各观察组Smad3表达差异无统计学意义(P>0.05),但对其基因及磷酸化,即Smad3 mRNA及p-Smad3的表达有影响,且与M组比较,Z组,X组,P组中均不同程度降低(P<0.05),D组中表达虽低于M组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论：大黄虫丸对TGF-β1诱导后A549细胞发生EMT程度与Smad3 mRNA及Collagen Ⅲ的表达有影响,推测大黄虫丸对IPF的保护机制可能与不同程度阻断或逆转了TGF-β1/Smad3介导的EMT有关。