靶向沉默ANXA3对大鼠吗啡镇痛耐受及炎症反应的影响

目的研究靶向沉默ANX A3对大鼠吗啡镇痛效能的作用及其可能机制。方法雄性SD大鼠连续7 d鞘内注射15μg吗啡建立慢性吗啡镇痛耐受模型。将30只大鼠随机分为吗啡组、阴性对照组和ANXA3 siRNA组。实验第1、3、5和7天,通过测定各组大鼠后爪的热缩足反射潜伏期(PWL)计算最大可能镇痛效应百分数(%MPE)。第7天行为学测试结束后麻醉并处死大鼠,收集各组大鼠脊髓腰膨大,采用Western blotting及RT-PCR测定ANXA3mRNA及蛋白表达水平。采用RT-PCR和ELISA试剂盒测定肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6的mRNA及蛋白表达水平。采用Western blotting评价细胞外信号调节激酶(ERK)和c-Jun氨基端激酶(JNK)的磷酸化水平。结果注射吗啡后,阴性对照组%MPE与吗啡组比较无明显差异。注射吗啡第3、5、7天,ANXA3 siRNA组%MPE均明显高于阴性对照组(78.27%±8.50%vs. 71.75%±5.98%、64.37%±25.94%vs. 43.56%±2.69%、39.96%±3.27%vs.13.81%±1.25%,P<0.05)。与吗啡组比较,阴性对照组ANXA3mRNA和蛋白相对表达水平无明显差异。ANXA3siRNA组的ANXA3 mRNA和蛋白相对表达水平均低于阴性对照组(0.47±0.09 vs. 1.14±0.08、0.38±0.05 vs. 1.15±0.21,P <0. 0 5)。与吗啡组比较,阴性对照组T N F-α、 I L-1β和I L-6蛋白浓度无明显差异。A N X A 3s i R N A组的T N F-α、IL-1β和IL-6蛋白浓度均低于阴性对照组[(210.15±19.86) pg/gvs.(394.93±54.18) pg/g、(313.42±42.19) pg/gvs.(534.26±49.78) pg/g、(434.68±49.15) pg/gvs.(794.92±98.32) pg/g,P<0.05]。与吗啡组比较,阴性对照组p-ERK和p-JNK蛋白相对表达水平无明显差异。ANXA3 siRNA组p-ERK和p-JNK蛋白相对表达水平明显均低于阴性对照组(0.55±0.04vs.1.07±0.12、0.68±0.07vs.1.15±0.04,P<0.05)。结论靶向沉默ANXA3可能通过调控ERK和JNK的磷酸化水平增强吗啡的镇痛效能并减轻炎症反应。