人参糖肽的结构及其对Aβ25-35处理PC12细胞的抗凋亡作用

目的：研究人参糖肽的结构，探讨其对β淀粉样蛋白_25-35（Aβ_25-35）处理PC12细胞凋亡的保护作用，为开发人参抗阿尔茨海默病（AD）药物奠定理论基础。方法：采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）与Q ExactiveOrbitrap质谱联用分析人参糖肽结构。将鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞分为6组，加入含不同浓度（0、6.25、12.50、25.00、50.00和100.00 μmol·L^-1） Aβ_25-35的培养基，采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法测定PC12细胞的存活率。将PC12细胞分为空白对照组、模型组和给药组，模型组加入含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基，给药组加入不同浓度（0.03、0.10、0.30和1.00 g·L^-1）人参糖肽和含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基。采用CCK-8法测定PC12细胞的存活率，采用Annexin Ⅴ-FITC/PI法测定人参糖肽和Aβ_25-35处理后PC12细胞的凋亡率。将PC12细胞分为空白对照组、模型组和人参糖肽给药组，模型组加入含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基，给药组加入不同浓度（0.10和0.30 g·L^-1）人参糖肽和含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基，采用流式细胞术测定不同细胞周期PC12细胞的百分比。结果：人参糖肽结构分析得到肽链为NLSHYHSGSS、糖基为N1-HexNAc，肽链为SGSSSSSSSEDDGMGR、糖基为S6-HexNAc等20多个人参糖肽结构。当Aβ_25-35浓度为50 μmol·L^-1时，PC12细胞存活率为（55.45±2.34）%；与空白对照组比较，不同浓度Aβ_25-35处理组PC12细胞存活率明显降低（P<0.01）。与空白对照组比较，模型组PC12细胞存活率明显降低（P<0.01）；与模型组比较，给药组细胞存活率明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较，模型组PC12细胞凋亡率升高（P<0.01）；与模型组比较，给药组细胞凋亡率降低（P<0.05）。与空白对照组比较，模型组S期PC12细胞百分比升高（P<0.05）；与模型组比较，给药组S期PC12细胞百分比降低（P<0.05）。结论：利用质谱法分析得到人参糖肽结构。人参糖肽可有效抑制Aβ_25-35处理PC12细胞的凋亡，具有神经细胞保护作用，其抗凋亡活性作用可能与抑制细胞S期阻滞有关。