| Bcl-x微基因及其突变微基因的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 黄波,王小中,王彩纹,李 静,章海斌,熊火梅,肖 芸.Bcl-x微基因及其突变微基因的构建与鉴定[J].中国神经再生研究,2010,14(2):289-293. |
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| 作者姓名： | 黄波 王小中 王彩纹 李 静 章海斌 熊火梅 肖 芸 |
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| 作者单位： | 南昌大学第二附属医院检验科，江西省南昌市 330006,南昌大学第二附属医院检验科，江西省南昌市 330006,南昌大学第二附属医院检验科，江西省南昌市 330006,南昌大学第一附属医院检验科，江西省南昌市 330006,南昌大学第二附属医院检验科，江西省南昌市 330006,南昌大学第二附属医院检验科，江西省南昌市 330006,南昌大学第二附属医院检验科，江西省南昌市 330006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30700338) |
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| 摘 要： | 背景：Bcl-xL/Bcl-xS比值的增高与肿瘤的发生密切相关，其机制尚未阐明。Bcl-x微基因是研究其选择性剪接机制的重要工具。
目的：构建人类凋亡相关基因Bcl-x的微基因及其突变微基因，为进行Bcl-x基因选择性剪接方面的研究打下基础。
方法：首先采用PCR法从人白血病细胞K562基因组DNA中扩增出Bcl-x基因外显子2及内含子2的5’部分序列片段，定向插入真核表达载体pcDNA3.1(-)中，然后扩增出Bcl-x基因内含子2的3’端及外显子3部分序列，定向插入上一片段下游，构建成 pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因，测序鉴定无误后,用pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因瞬时转染HL-60，通过RT-PCR方法对其在细胞内表达作进一步鉴定。另外，以pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因为模板，利用反向PCR法构建突变微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE1(M)。
结果与结论：以人白血病细胞K562基因组DNA为模板，P1和P2为引物，经PCR扩增得约686 bp的目的片段；以P3和P4为引物扩增出约178 bp的目的片段。微基因pcDNA3.1(-)-bcl-x 分别经Xba Ⅰ和Eco RⅠ双切、Xba Ⅰ和Xho Ⅰ双切鉴定均得到预期的片段，突变微基因 pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE1(M)经EcoR Ⅰ单酶切后，均得到预期片段，测序结果正确，表明成功构建人类凋亡相关基因Bcl-x的微基因及其突变微基因。
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| 关 键 词： | 微基因 突变微基因 选择性剪接 Bcl-x 顺式作用原件 |
| 收稿时间： | 6/1/2009 12:00:00 AM |
Construction and identification of Bcl-x minigene and its mutated minigene |
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| Huang Bo,Wang Xiao-zhong,Wang Cai-wen,Li Jing,Zhang Hai-bin,Xiong Huo-mei and Xiao Yun.Construction and identification of Bcl-x minigene and its mutated minigene[J].Neural Regeneration Research,2010,14(2):289-293. |
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| Authors: | Huang Bo Wang Xiao-zhong Wang Cai-wen Li Jing Zhang Hai-bin Xiong Huo-mei and Xiao Yun |
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| Institution: | Department of Laboratory Medicine, Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China,Department of Laboratory Medicine, Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China,Department of Laboratory Medicine, Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China,Department of Laboratory Medicine, First Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China,Department of Laboratory Medicine, Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China,Department of Laboratory Medicine, Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China,Department of Laboratory Medicine, Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | minigene mutagenesis minigene alternative splicing bcl-x cis-acting element |
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