TMEFF1对神经母细胞瘤细胞系增殖的调控

目的 探究具有表皮生长因子结构域和两个卵泡抑素样结构域的跨膜蛋白1(TMEFF1/tomoregulin1)对神经母细胞瘤(NB)细胞系SN-K-BE(2)增殖和迁移的调控效应.方法 RT-qPCR检测神经母细胞瘤细胞系SN-K-BE(2)、IMR32、SK-N-SH、SK-N-AS 和正常细胞系 MCF 10A、hTERT RPE-1 中 TMEFF1 mRNA 表达量.利用小分子干扰 RNA(siRNA)瞬时敲低 MCF 10A、hTERT RPE-1 细胞和 SN-K-BE(2)NB 细胞中 TMEFF1 表达,RT-qPCR 检测TMEFF1 mRNA瞬时敲低效果后,结晶紫染色、实时无标记细胞分析(RTCA)检测细胞增殖;CellTiter-Glo(CTG)检测细胞活性.利用短发夹RNA(shRNA)稳定敲低正常细胞系和NB细胞系中TMEFF1表达,进一步通过集落形成实验、RTCA、CTG检测细胞增殖和活性,此外,通过免疫荧光检测Ki-67细胞阳性率,细胞划痕实验检测细胞迁移率.结果 与正常细胞系相比,NB细胞系中TMEFF1 mRNA表达量显著较高(P＜0.001).敲低TMEFF1对正常细胞系增殖影响无统计学意义,但在SN-K-BE(2)细胞中敲低TMEFF1,RTCA和集落形成实验结果显示细胞增殖能力减弱(P＜0.05),免疫荧光结果显示Ki-67阳性细胞率减少(P＜0.001),CTG结果显示细胞活性降低(P＜0.01),细胞划痕实验结果显示敲低组细胞迁移率显著低于对照组(P＜0.01).结论 TMEFF1是一种特异在NB细胞中高表达的膜蛋白,TMEFF1敲低后不影响正常细胞系的增殖,但显著抑制NB细胞系的增殖、迁移,提示TMEFF1可能在NB发生发展中发挥重要作用,可能成为NB靶向治疗的潜在新靶点.