重组降血压肽VLPVPR酶解制备工艺优化及降解原因分析

背景：采用基因工程技术与酶解法制备重组降血压肽VLPVPR，酶解产物为多肽混合物，易受微生物侵染而发生降解。目的：分析胰蛋白酶酶解制备重组降血压肽VLPVPR过程中影响VLPVPR稳定性的因素，并对酶解工艺进行了优化。方法：采用反相高效液相色谱法检测酶解产物中降血压肽VLPVPR 的含量。工程菌表达产物经0.22 μm膜过滤除菌，观察其酶解过程中降血压肽VLPVPR含量随时间的变化情况，与不过滤除菌酶解过程进行比较，探讨杂菌污染和工程菌自身蛋白水解酶对VLPVPR降解的影响。采用正交试验对温度、pH、酶浓度和时间等酶解工艺参数进行优化。结果与结论：降血压肽VLPVPR标准品与胰蛋白酶作用4 h，含量基本不发生变化，差异无显著性意义(P > 0.05)，说明胰蛋白酶不能再进一步降解VLPVPR。经过过滤除菌后的细胞破碎上清液在酶解过程中的VLPVPR含量在达到最大后迅速降低，未经过滤除菌的样品中的降血压肽比过滤除菌的样品降解得更快，差异有显著性意义（P < 0.05），表明工程菌释放的胞内酶和杂菌污染是导致VLPVPR降解的主要原因。通过正交试验优化了酶解制备重组降血压肽VLPVPR的最佳条件：温度30 ℃，pH9.5，胰蛋白酶终浓度180 U/mL，酶解时间1 h。关键词：降血压肽；制备；酶解；降解；生物材料与生物技术doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.25.017

Enzymolysis technology optimization and degradation reasons of recombinant antihypertensive peptides VLPVPR