| 一种基于ELISA检测氮芥诱导的MGMT-DNA交联体的方法 |
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| 引用本文： | 阳慧琼,程晋,丁娇艳,叶枫,邹仲敏. 一种基于ELISA检测氮芥诱导的MGMT-DNA交联体的方法[J]. 第三军医大学学报, 2016, 0(18): 1997-2001. DOI: 10.16016/j.1000-5404.201602026 |
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| 作者姓名： | 阳慧琼 程晋 丁娇艳 叶枫 邹仲敏 |
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| 作者单位： | 第三军医大学军事预防医学院毒理学研究所, 重庆,400038 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年项目(81302862;81502711),全军医学科技“十二五”重大项目(AWS11C004)Supported by the National Natural Science Foundation for Young Scholars of China (81302862 |
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| 摘 要： | 目的 建立一种基于酶联免疫吸附法检测O6-烷基转移酶(O6-Methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)与DNA的交联体(MGMT-DNA crosslink,M-DPC)含量的简便方法.方法 整合当前技术提取及纯化M-DPC、定量M-DPC样品中dsDNA含量、优化DPC中抗原在ELISA板的包被能力等关键环节.以不同浓度氮芥处理人支气管上皮细胞HBE,在指定的时间收集细胞,使用细胞核抽提/裂解/Tris饱和酚回收法制备M-DPC样品.采用SYBR Green Ⅰ染色方法对M-DPC样品中dsDNA进行定量.采用全能核酸酶对M-DPC样品中脱氧核糖核酸降解,以增强M-DPC样品中抗原在ELISA板的包被能力.最终,包被后的多孔板检测采用常规的ELISA.结果 无需高速离心机和放射性同位素等,使用常规方法提取了细胞M-DPC.SYBR Green Ⅰ检测基因组dsDNA的线性范围为2 ng至1.5 μg,可以用于提取的M-DPC所含dsDNA的定量,据此统一样本用量.M-DPC可以通过ELISA检出,且在一定范围内有线性关系.氮芥染毒3h后M-DPC含量有显著增加,且对氮芥剂量有依赖.至24 h M-DPC含量无显著降低.结论 所建立的ELISA检测M-DPC的方法快速、经济、灵敏、高通量,也可应用于部分其他交联蛋白的检测.氮芥染毒所致M-DPC形成有时间和剂量效应.
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| 关 键 词： | MGMT-DNA交联物 ELISA SYBR Green Ⅰ 氮芥 |
An ELISA-based method to detect MGMT-DNA crosslink induced by nitrogen mustard |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | MGMT-DNA crosslinking complex ELISA SYBR Green Ⅰ nitrogen mustard |
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