靶向TLR4 的siRNA 慢病毒感染减少过氧化氢诱导的心肌H9C2 细胞凋亡及氧化损伤

目的:研究沉默TLR4对过氧化氢(H_2O_2)诱导的心肌H9C2细胞凋亡及氧化损伤的影响。方法:用H_2O_2处理心肌H9C2细胞,qRT-PCR和Western blot检测细胞中Toll样受体4(TLR4) mRNA和蛋白水平。用siRNA TLR4慢病毒感染心肌H9C2细胞,H_2O_2诱导以后,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)和剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)水平,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平,ELISA法检测培养液上清中TNF-α、IL-6水平。结果:H_2O_2诱导处理以后的心肌H9C2细胞中TLR4mRNA和蛋白水平均明显高于未经诱导的心肌H9C2细胞(P0. 05)。siRNA TLR4慢病毒感染后可以降低心肌H9C2细胞中TLR4 mRNA和蛋白水平。H_2O_2诱导后的心肌H9C2细胞凋亡率升高,Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,细胞中SOD活性降低,MDA水平升高,ROS水平也升高,同时细胞培养液中LDH水平升高,细胞分泌的TNF-α、IL-6增多,与未经诱导的心肌H9C2细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。敲低TLR4后的心肌H9C2细胞经H_2O_2诱导处理以后,细胞凋亡率降低,细胞中Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平降低,细胞中SOD活性升高,MDA水平降低,ROS水平也降低,同时细胞培养液中LDH水平降低,细胞分泌的TNF-α、IL-6减少,与单纯经H_2O_2诱导处理的心肌H9C2细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。结论:沉默TLR4减弱H_2O_2诱导的心肌H9C2细胞凋亡及氧化损伤,减少细胞中ROS的聚集,减少心肌H9C2细胞分泌炎症因子。