| 细菌内同源重组构建pAdeasy-1/hp27mt腺病毒质粒 |
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| 引用本文： | 陈珺,徐少勇,邓长生,王家宁,黄永章. 细菌内同源重组构建pAdeasy-1/hp27mt腺病毒质粒[J]. 郧阳医学院学报, 2003, 22(2): 65-69 |
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| 作者姓名： | 陈珺 徐少勇 邓长生 王家宁 黄永章 |
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| 作者单位： | [1]郧阳医学院附属人民医院消化科，湖北十堰442000 [2]武汉大学中南医院消化内科 [3]郧阳医学院临床医学研究所，湖北十堰442000 |
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| 摘 要： | ![]()
目的 :采用细菌内同源重组法高效制备含hp2 7mt基因的重组腺病毒质粒。 方法 :hp2 7mt自载体pORF9-hp2 7mt中切出 ,亚克隆至腺病毒穿梭质粒 pShuttle -CMV中 ,构成穿梭质粒 pShuttle -CMV/hp2 7mt;然后再用经PmeI酶切的 pshuttle-CMV/hp2 7mt转化含 pAdeasy - 1的超感受态BJ51 83 ,采用细菌内同源重组法构建腺病毒质粒pAdeasy - 1 /hp2 7mt;筛选同源重组质粒阳性克隆 ,提取pAdeasy - 1 /hp2 7mt质粒经PacⅠ酶切鉴定和PCR鉴定。结果 :线性化的pShuttle-CMV/hp2 7mt转化含pAdeasy - 1的超感受态BJ51 83 ,1 2 - 2 0h后获得了30 %阳性重组质粒克隆 ,经酶切获得一大于 2 0kb的大片段和 3 .0kb的特征性片段 ,PCR反应扩增出了 2 75bp的片段 ,证明重组腺病毒质粒中已成功插入目的基因hp2 7mt。 结论 :用细菌内同源重组法可制备含hp2 7mt的重组腺病毒质粒且经济高效、简便、快捷。为转染 2 93细胞制备高滴度重组腺病毒提供高纯度的重组腺病毒质粒
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| 关 键 词： | 细菌 同源重组 重组腺病毒质粒 hp27mt |
| 文章编号： | 1006-9674(2003)02-0065-05 |
| 修稿时间： | 2003-01-16 |
Construction of Recombinant Adenovirus Plasmid Containing hp27mt By Homologous Recombination in Bacteria |
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| CHEN Jun,XU Shao-yong,DENG Chang-sheng,et al.. Construction of Recombinant Adenovirus Plasmid Containing hp27mt By Homologous Recombination in Bacteria[J]. Journal of Yunyang Medical College, 2003, 22(2): 65-69 |
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| Authors: | CHEN Jun XU Shao-yong DENG Chang-sheng et al. |
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| Abstract: | ![]()
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| Keywords: | bacterium homlogous recombination recombinant adenovirus plasmid hp27mt |
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