慢性髓性白血病bcr/abl融合基因的克隆与表达 |
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作者姓名: | 周永安, 张景萍 |
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作者单位: | [1]山西省儿童医院,山西太原030013; [2]太原市中心医院,山西太原030001 |
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基金项目: | 本课题为山西省自然科学基金资助项目(课题编号:20051104). |
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摘 要: | 目的:克隆bcr/abl融合基因融合位点基因片段。方法:以慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株总RNA作为模板,采用RT—PCR方法扩增包含Bcr/abl(b3a2)融合位点基因片段。将RT—PCR物按正确的阅读框架,定向克隆到pEGFP—N3的下游,将重组质粒转化大肠杆JM109大肠杆菌,用PCR初筛,将PCR扩增阳性的重组子用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定,并进行序列的测定。结果:扩增出470bp的Bcr/abl融合位点基因片段,构建重组质粒pEGFP—bcr/abl,酶切产物的大小分别与预期相符。结论:成功地扩增bcr/abl融合位点基因片段及构建真核表达重组质粒pEGFP—bcr/abl,为在体外表达重组bcr/abl蛋白奠定基础。
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关 键 词: | 慢性髓性白血病 bcr/abl融合基因 克隆 鉴定 |
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