大肠杆菌表达的重组人PAI-2的纯化及其生物化学特性

目的研究建立大肠杆菌表达的重组人ＰＡＩ－２（ｒｈＰＡＩ－２）的纯化方法，并对ｒｈＰＡＩ－２蛋白进行理化和生物学性质的研究。方法工程菌被高压匀浆后，经硫酸铵分级沉淀，用分子筛、离子交换和疏水性色谱进行分离，得到了ｒｈＰＡＩ－２蛋白。对ｒｈＰＡＩ－２进行了复性，对ｒｈＰＡＩ－２的温度、ｐＨ、盐浓度、氧化剂敏感性、二级速率常数及抗ＳＤＳ复合物形成等理化性质和生物学特性进行了测定。结果每升菌液可获得约３０ｍｇ纯度达９０％的蛋白质，比活性为１１８６６ＡＩＵ／ｍｇ，得率为１９．２％。当温度高至６０℃时，ｒｈＰＡＩ－２迅速失活；当ｐＨ小于３时，ｒｈＰＡＩ－２完全失活；当盐浓度和Ｈ２Ｏ２浓度分别在１．５和０．５ｍｏｌ／Ｌ时，ｒｈＰＡＩ－２的活性仍维持在９０％以上；ｒｈＰＡＩ－２可与尿激酶形成抗ＳＤＳ复合物。结论成功地从大肠杆菌中分离纯化了ｒｈＰＡＩ－２。ｒｈＰＡＩ－２与天然ＰＡＩ－２在理化性质和生物学特性上基本一致。