聚氧乙烯辛烷基酚制备去细胞神经移植体的超微结构改变

目的 采用聚氧乙烯辛烷基酚(Triton X-100)去除异体周围神经中的雪旺细胞和髓鞘,制取天然神经细胞外基质的超微结构.方法 健康新西兰大耳白兔30只,分别自梨状肌下缘水平以远切取10 mm双侧坐骨神经60根,随机分为六组,其中12h组、24 h组、48 h组、96 h组、1 w组用于化学萃取,新鲜神经为对照组.神经萃取前先在手术显微镜下剪去表面的脂肪组织和部分神经外膜,然后置4℃蒸馏水中静置6h,以使细胞和髓鞘在低渗液体中膨胀、细胞被胀破,使之易于Triton X-100的渗透；再将神经放人3％的Triton X-100水溶液中分别静置12h,然后置于蒸馏水中震荡、漂洗6h,以使溶于水的Triton X-100膜蛋白复合体充分脱离神经干.如此反复,并且每次更换蒸馏水、Triton X-100水溶液.五组神经TritonX-100萃取时间分别为12h、24 h、48 h、96 h、1 w.在新鲜神经和萃取后的神经中段分别切取一段神经,2.5％戊二醛固定后,制成扫描电镜标本,用日立S-3500N型扫描电镜观察神经的立体结构并采集图像.结果 扫描电镜下观察,随着萃取时间的延长,神经内的轴突、髓鞘逐渐减少,少于96 h时仍可见有轴突、髓鞘的残留.萃取时间至96 h时神经内的轴突、髓鞘已被完全去除,可见由胶原纤维构成的立体管状结构,胶原纤维仍维持原有的位置、形态及结构特征,管内并可见膜样结构,为雪旺细胞基底膜.萃取时间为1 w的标本扫描电镜下观察,由胶原纤维构成的立体管状结构与96 h的标本相似,但结构较之稍散乱,形成的管腔不规则.结论 用Triton X-100化学萃取方法是制备组织工程化神经移植体的有效方法.萃取人类长段粗大神经时,为使雪旺细胞、轴突、髓鞘去除完全,可适当延长萃取时间.