不同血清浓度对小鼠成纤维细胞L929生长增殖和胶原蛋白分泌的影响

目的:观察不同血清浓度对小鼠L929成纤维细胞生长增殖和分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和羟脯氨酸的影响,以了解适宜成纤维细胞生长和分泌的最佳血清浓度.方法:L929细胞分成6组:分别以血清浓度为0 mL/L、200 mL/L、400 mL/L、600 mL/L、800 mL/L和1 000 mL/L的培养液培养,培养2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组细胞进行HE和吖啶橙荧光染色,了解细胞形态和生长状况变化.在2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组上清,酶联免疫法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原,羟脯氨酸水平.磺基罗丹明B(SRB)法检测培养2 d、4 d、6 d和8 d后各组细胞增殖情况.结果:(1)L929在血清浓度很高和很低(0%和100%)时细胞增殖率都明显下降,20%组血清浓度的增殖率最高;40%～100%组,随着血清浓度增高,细胞增殖率反而下降;(2)HE和AO染色发现0%血清浓度组细胞出现凋亡情况,80%组细胞开始出现空泡化,100%血清浓度时细胞空泡化严重.20%～60%血清浓度细胞形态基本正常.(3)0%、80%和100%血清浓度在培养的8 d内Ⅰ型胶原浓度一直比较低,40%血清浓度Ⅰ型胶原浓度最高.培养的第2天,各浓度组的Ⅲ胶原均有增加,后有所下降,6～8 d时又再次上升.各组血清浓度组的L929细胞在不同培养时间羟脯氨酸浓度变化不大.结论:20%～40%血清浓度最适合成纤维细胞的生长,增殖和胶原分泌,血清浓度过高或过低都会引起细胞增殖率下降、细胞凋亡、空泡化和胶原的分泌减少,自体血清注射时采用合适的血清浓度可能会取得更好的效果.

The effect of serum concentration on the growth, proliferation and collagen secretion in mouse L929 fibroblasts