| 重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳酸链球菌表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 马高峰,张振书,杨晓强,武金宝,陈学清. 重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳酸链球菌表达载体的构建[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2007, 11(3): 527-529,533 |
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| 作者姓名： | 马高峰 张振书 杨晓强 武金宝 陈学清 |
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| 作者单位： | 南方医科大学南方医院消化内科,广东省广州市,510515 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;广东省自然科学基金 |
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| 摘 要： | ![]()
目的:构建重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳酸链球菌表达载体,为进一步研究人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在乳链菌的表达及其治疗价值奠定基础。方法:实验于2005-04/2006-03在南方医科大学南方医院消化病研究所完成。①载体pNCSF的构建:将质粒集落刺激因子及含有P59启动子、USP45蛋白信号肽的pNBC1000质粒分别加入BamH Ⅰ和Pst Ⅰ进行双酶切,并用Apa Ⅰ、Sac Ⅰ进行双酶切鉴定,重组质粒命名为pNCSF。②SDGFP的TA克隆及载体pNCSFGFP的构建:将经过优化适合在乳链菌表达的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因克隆于含有P59启动子、USP45蛋白信号肽的pNBC1000载体,得到重组质粒pNCSF;同时设计上下游引物经PCR扩增增强荧光表达蛋白(EGFP),TA克隆后经测序验证,再连接于pNCSF获得重组质粒pNCSFGFP。③载体pTRCSF、pTRCSFGFP的建立:将获得的pNCSF和pNCSFGFP进一步克隆于穿梭载体pTR1001c,以获得人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳链菌表达载体pTRCSF及pTRCSFGFP。结果:①载体pNCSF构建结果:酶切鉴定产物经1.0%的琼脂糖凝胶电泳后,发现有(含启动子P59、信号肽USP45、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)720bp的目的片段。②SDGFP的TA克隆及载体pNCSFEGFP的构建结果:SDGFP阳性克隆产物经EcoRⅠ酶切鉴定得到775bp目的片段。pNCSFEGFP酶切鉴定产物经1.0%的琼脂糖凝胶电泳后,发现有(含启动子P59、信号肽USP45、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、SDGFP)1495bp的目的片段。③穿梭质粒pTRCSF、pTRCSFGFP酶切鉴定结果:经Xba Ⅰ、Sac Ⅰ进行双酶切鉴定,分别得到约717bp、1492bp大小目的片段。结论:获得了人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳链菌表达载体pTRCSF及pTRCSFGFP,并经酶切鉴定和测序证实。
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| 关 键 词： | 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子,重组/遗传学 链球菌属 基因表达 遗传/载体 |
| 文章编号： | 1673-8225（2007）03-00527-03 |
| 收稿时间： | 2006-08-11 |
| 修稿时间： | 2006-10-17 |
Construction of the expressive vector of recombinant human granulococyte-macrophage colony stimulating factor in lactococcus lactis |
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| Ma GF,Zhang ZS,Yang XQ,Wu JB,Chen XQ. Construction of the expressive vector of recombinant human granulococyte-macrophage colony stimulating factor in lactococcus lactis[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2007, 11(3): 527-529,533 |
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| Authors: | Ma GF Zhang ZS Yang XQ Wu JB Chen XQ |
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| Abstract: | ![]()
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